急性T淋巴细胞性白血病CCR9高表达的产生及调控机制研究

Our previous study found that CCR9 was highly expressed in CD4+ T leukemia cells of T-ALL, which was strongly associated with metastasis and drug resistance in leukemia.However,the regulatory mechanism of high expression of CCR9 is not known. It is reported that T-ALL originates from abnormal activation of the Notch1 signaling pathway. In solid tumors, studies have shown that the high expression of Notch1 upregulated the expression of NFAT.The activation of NFAT can promote the metastasis of tumor and enhance the drug resistance. Our recent experimental results show that: the expression level of Notch1 and NFATc2 in T-ALL cells was significantly higher than that of control group; In addition,one latest study found that NFATc2 is a necessary co-stimulatory molecule in RA-dependent high expression of CCR9 in normal T cells. In this project, we will explore the mechanism of high expression of CCR9 by EMSA, ChIP and RNAi techniques. We intend to find new target markers for blocking the metastasis and drug resistance of T-ALL.Our results will provide new clues for therapy of T-ALL.

我们前期研究发现CCR9在T-ALL病人CD4+白血病T细胞上异常高表达与白血病转移和耐药密切相关，但有关CCR9高表达的产生及调控机制尚不明确，国内外未见相关研究。文献报道T-ALL发病源于Notch1信号通路的异常激活，实体瘤中研究表明Notch1的异常高表达上调NFAT的表达水平，而NFAT的活化可以促进肿瘤的转移并增强其耐药性。我们新近实验结果显示：T-ALL患者白血病细胞中Notch1和NFATc2的表达水平明显高于对照组；最新文献报道NFATc2是正常T细胞中视黄酸依赖的CCR9高表达机制中必需的协同刺激分子。为明确T-ALL中CCR9高表达的产生及调控机制，本研究拟采用EMSA，ChIP，RNAi等技术，以NFAT为切入点，探讨Notch1-HES1-NFAT信号通路在CCR9高表达的产生及调控机制中的作用，寻找阻断白血病转移和耐药的新靶标，为T-ALL的治疗提供新思路。

我们前期研究发现CCR9在T-ALL病人CD4+白血病T细胞上异常高表达与白血病转移和耐药密切相关，但有关CCR9高表达的产生及调控机制尚不明确，国内外未见相关研究。本课题主要研究了急性T淋巴细胞白血病CCR9高表达的产生及调控机制。Notch1的抑制剂DAPT可成功抑制T-ALL细胞系MOLT4 细胞Notch1的表达，同时Notch1的下游分子HES-1、NFATc1/c2/c3及CCR9的表达下降，并且有效抑制NFAT的入核。Notch1激活的NFAT 促进T-ALL细胞的迁移和耐药。在MOLT4细胞中，Wnt家族中仅Wnt2b、Wnt5a和Wnt10b有明显表达，其中Wnt5a经CCL25处理后表达水平显著升高；抑制PKC后显著降低了CCL25诱导的Wnt5a表达。GSEA基因富集分析的结果提示Wnt5a在成人T-ALL中与多种迁移侵袭生物学过程相关；体外迁移和侵袭实验证实Wnt5a可以促进MOLT4细胞的迁移和侵袭，抑制或沉默PI3K/Akt或RhoA后显著降低Wnt5a诱导的MOLT4细胞的迁移和侵袭。动物实验表明Wnt5a可单独或协同CCL25促进MOLT4细胞向肝脏转移（浸润）。Wnt5a可能通过协同CCL25诱导RhoA的活化参与CCL25介导的MOLT4细胞向其他器官的转移（浸润）。另外，本研究发现miR-146b-5p在T-ALL临床样本及细胞系中低表达，并可抑制T-ALL细胞迁移与侵袭作用，而IL-17A为miR-146b-5p的靶基因。T-ALL细胞可自分泌IL-17A，同时高表达IL-17RA。IL-17A通过NF-kB信号通路上调MMP9的表达，从而促进T-ALL细胞发生迁移与侵袭。IL-17A促进MOLT4细胞向肝脏迁移，同时中促进MDSC细胞在小鼠脾脏中浸润。在T-ALL治疗中，控制转移和耐药是目前治疗的关键，本研究为阐明 CCL25/CCR9 介导的T-ALL 转移（浸润）提供理论依据，为T-ALL 的治疗提供新的潜在治疗靶标。