温阳散结汤通过TGF-β信号通路调控肿瘤相关巨噬细胞与调节性T细胞平衡抑制肺癌免疫逃逸的研究

Tumor-associated macrophages (TAMs) and regulatory T cells （Treg）are the major components of the lung cancer microenvironment. TAMs secret chemokines like TGF-β and recruit Treg cells to promote immunosuppressive microenvironments and tumor immunity escape，however， the exact escape mechanism remains unclear. Previous studies have shown that WenYangSanJieTang can inhibit the growth of lung cancer and regulate the TGF-β/Smad signaling pathway to inhibit the invasion and metastasis .On the basis of the assumption that "WenYangSanJieTang could adjust the balance of TAMs/Treg cells by the transduction of TGF-β signaling pathway, increasing the apoptosis of tumor cells and tumor immunity escape." We will establish both Lewis lung cancer model in vivo and TAMs with Treg co-culture system、Treg with lung cancer cell co-culture system in vitro. We use live imaging technology, flow cytometry, gene vector construction, immunohistochemistry, immunofluorescence and other techniques to observe WenYangSanJieTang according the TGF-β signaling pathway to regulate TAMs / Treg in the remodeling of immune microenvironment，which provide the basis for clinical application.

在肺癌中，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和调节性T细胞（Treg）是肺癌微环境中的主要组成部分，M2型TAMs分泌的细胞因子如TGF-β等招募活化Treg细胞形成的免疫抑制微环境，促使肺癌细胞免疫逃逸。前期研究显示，M2型肿瘤相关巨噬细胞通过TGF-β信号通路促进肺癌细胞侵袭转移。同时，温阳散结汤有抑制肺癌生长，调控TGF-β/Smad信号通路的作用。据此提出“温阳散结汤调控TGF-β信号通路转导，重塑TAMs/Treg细胞平衡，抑制免疫逃逸，增加肿瘤细胞凋亡”的假说。课题采用Lewis肺癌模型及体外TAMs和Treg细胞、Treg与肺癌细胞共培养模型，运用活体成像技术、流式细胞术、基因载体构建、免疫组化、免疫荧光等技术，观察温阳散结汤对TGF-β信号通路及TAMs/Treg的调节作用，重塑免疫微环境，抑制免疫逃逸，为临床研究打下基础。

本次研究主要目的为研究温阳散结方调控M2型肿瘤相关巨噬细胞影响TGF-β信号通路调控Treg细胞，干预肿瘤免疫逃逸的分子机制。首先研究通过文献研究中医“培土生金，温阳散结”改善肿瘤免疫微环境中医理论研究，从阴阳、脏腑、证素、中药等方面分析培土生金，温阳散结的理论依据，第二部分通过体外研究，证明温阳散结汤对肺癌细胞的抑制作用及调控 TAMs/Treg 产生肺癌免疫逃逸靶点预测和筛选，发现TGF－β1 /SMAD2 /3信号通路是调控恶性肿瘤细胞扩散转移机制的重要过程，基因DSCCI是肺腺癌恶性预后的生物标志物之一。第三部分发现温阳散结汤通过肿瘤相关巨噬细胞不同信号通路如NF-κb、TGF-β/ERK调控肺癌侵袭转移。最后，研究发现温阳散结汤改善的肿瘤相关巨噬细胞/Treg细胞肿瘤免疫抑制环境增加化疗敏感性，为临床使用温阳散结汤提供实验依据。