ASC调控牙龈卟啉菌诱导根尖周炎骨吸收的机制

根尖周病是由细菌感染引起根尖周骨破坏的炎症疾病。牙龈卟啉菌为慢性根尖周炎感染根管内定植菌之一。根尖周骨组织吸收与宿主细胞炎症反应产生的细胞因子有关。ASC作为上游分子调控细胞因子的表达。本课题拟通过质粒构建，建立ASC不同表达水平的牙周膜成纤维细胞与成骨细胞的共培养模型，利用牙龈卟啉菌攻击细胞的体外模型的基础研究；实验性根尖周炎动物模型的在体研究；人根尖周病变组织标本的临床研究，采用real-time PCR、Western blot、免疫组化、Micro-CT、LSCM、液态芯片筛选检测根尖周骨吸收相关细胞因子表达，探讨根尖周骨吸收激活/抑制的信号通路，分析ASC对根尖周骨吸收和炎症因子表达的调控作用以及与患牙根尖周病变的程度、愈合、复发的相关性，阐明ASC在根尖周炎骨吸收中的调控机制，评估其在根尖周病变发生发展中的作用和地位，为根尖周病分子水平的防治提供可能的靶向基因。

根尖周炎是指发生在根尖周围组织的炎症性疾病，主要是根尖周组织对聚集在根管内的微生物产生的炎症反应发展而来。固有免疫系统中发挥中要作用的固有免疫识别受体，在识别微生物病原体并且诱发炎症反应的信号通路中起到了重要的作用。本项目首先通过免疫组化染色固有免疫识别受体TLR2/4，NOD1/2，NALP3/6在根尖肉芽肿和根尖囊肿组织中表达。再采用体外原代培养的人牙周膜成纤维细胞，进行以下实验：分别用逆转录PCR技术，流式细胞术和免疫荧光检测人牙周膜成纤维细胞中TLR2，TLR4，NOD1和NOD2受体的表达。用细菌及多种类型识别受体的特异性配体刺激人牙周膜成纤维细胞后，采取real-time PCR检测NLRP1/3，ASC，caspase-1的表达，用real-time PCR和western blot技术检测TRAF6的表达量。ELISA法检测人牙周膜成纤维细胞产生的促炎因子（IL-1β, IL-6,TNF-α等）表达量。最后，用小干扰RNA（siRNA）技术沉默ASC及TRAF6，检测TLR2/4，NOD1/2受体，NLRP1/3受体被激活后人牙周膜成纤维细胞释放促炎因子的表达量。研究TRAF6和ASC在P. gingivalis及其LPS、 Enterococcus faecalis及其LTA等诱导的人牙周膜成纤维细胞固有免疫炎症反应可能发挥关键作用.