补体激活蛋白CR2-Fc抑制HIV感染和靶向杀伤HIV生物效应的实验研究

艾滋病对人类健康造成的危害日益引起全世界的广泛关注，现有研究表明补体分子在HIV感染和免疫逃逸机制中扮演重要角色。目前在尚无有效疫苗预防和有效药物治疗情况下，充分发挥补体系统抗HIV 感染方面的优势成为新的研究热点。在本课题中，我们提出了利用补体分子抑制HIV感染和靶向杀伤HIV的新策略，以补体受体2（CR2）为靶向载体，抗体IgG1 Fc段作为补体激活物，将两者基因融合表达，构建一种新型靶向C3d分子的靶向补体激活蛋白CR2-Fc分子，并采用补体裂解抑制、流式细胞分析、生物传感器亲和力分析及生物学分布和免疫组化的方法鉴定其生物学活性；利用HIV感染的细胞模型，采用携带HIV-1 SF162株膜区假病毒中和实验和MTT比色实验研究新型靶向补体激活分子CR2-Fc 通过激活补体级联放大通路抑制HIV感染和靶向杀伤HIV 感染细胞的生物学效应。为研究新的艾滋病靶向治疗药物奠定基础。

艾滋病对人类健康造成的危害日益引起全世界的广泛关注，现有研究表明补体分子在HIV 感染和免疫逃逸机制中扮演重要角色。目前在尚无有效疫苗预防和有效药物治疗情况下，充分发挥补体系统抗HIV 感染方面的优势成为新的研究热点。在本课题中，我们提出了利用补体分子抑制HIV 感染和靶向杀伤HIV 的新策略，以补体受体2（CR2）为靶向载体，抗体IgG1 Fc 段作为补体激活物，将两者基因融合表达，构建一种新型靶向C3d 分子的靶向补体激活蛋白CR2-Fc 分子，并采用红细胞溶解实验、流式细胞分析、westbloting和SDS-PAGE等实验方法鉴定其生物学活性；利用HIV-1病毒感染的H9细胞模型，采用HIV-1病毒中和实验和ATP比色实验研究等方法研究新型靶向补体激活分子CR2-Fc 通过激活补体级联放大通路抑制HIV-1 感染和靶向杀伤HIV-1 感染细胞的生物学效应。利用双酶切及基因测序结果证实CR2-Fc基因序列正确，成功构建了重组真核表达载体。SDS-PAGE检测纯化蛋白的相对分子质量（Mr）与预期结果一致（60KD）。流式细胞术实验结果表明CR2-Fc具有很好的靶向C3d分子效应，表明重组融合蛋白CR2-Fc经蛋白纯化后具有很高的生物学活性。利用中和实验和ATP比色法检测新型补体激活蛋白具有很好靶向杀伤HIV-1病毒和很好的抑制HIV-1感染的作用。该课题为研究新的艾滋病靶向治疗药物奠定基础。