H9N2亚型禽流感病毒诱发树突状细胞功能调变的作用及其机制研究

H9N2 avian influenza viruses (AIVs) have been circulating worldwide in multiple avian species and endemic in poultry populations in china, which could cause immunosuppression in chickens and result in vaccination failure. However, the mechanisms of immunosuppression induced by H9N2 AIVs are poorly understood. DCs play a critical role in modulation host immune responses, and many viruses, including human influenza A virus, also induce host immunosuppression by dysregulating DCs functions. However, research on the strategies and mechanisms for dysregulation of DCs functions caused by H9N2 AIVs is lacing. In this work, employing chicken bone marrow-derived DCs, we will investigate the influence of H9N2 AIVs infection on DCs functions by cytokines and phenotypic changes, T-cell stimulatory capacity and engulfment capability. Furthermore, gene microarray, qRT-PCR, and RNAi tests will be performed to determine the molecular mechanisms of dysregulation of DCs functions caused by H9N2 AIVs. Finally, chicken models will be established, and flow cytometry and adoptive infusion of DCs will be performed to investigate the role of DCs in vaccination failure caused by H9N2 AIVs. These observations will provide helpful insights into the mechanisms of immunosuppression caused by H9N2 AIVs, and contribute to the development of novel vaccine and adjuvant,which will have an important guiding significance on the current clinical disease prevention.

H9N2禽流感病毒（H9N2 AIVs）可诱发鸡的免疫抑制近而导致疫苗免疫失败，但是H9N2 AIVs的免疫抑制机理目前仍不清楚。树突状细胞（DCs）在调控宿主的免疫应答中起关键作用，其功能的调变与包括人A型流感病毒在内的多种病毒诱发的免疫抑制相关。然而，H9N2 AIVs诱发的DCs功能调变及其机制鲜见报道。本项目拟以鸡骨髓DCs为模型，首先通过细胞因子、细胞表型、T细胞活化能力、吞噬能力等方面研究H9N2 AIVs对DCs功能的调变作用；然后通过基因芯片、qRT-PCR和RNA干扰等技术，研究DCs功能调变的分子基础；最后以鸡为模型，采用流式细胞术和过继输回等技术研究DCs在H9N2 AIVs抑制疫苗免疫应答中的作用。本项目的研究结果将有助于阐明H9N2 AIVs的免疫抑制机理，并为新型疫苗和佐剂的开发奠定理论基础，对当前的疫病防控具有重要的指导意义。

H9N2亚型禽流感病毒（AIVs）是目前对我国养鸡业危害最为严重的病原之一，其对养鸡业的主要危害为导致鸡的免疫功能下降，进而诱发疫苗的免疫失败或者增加继发感染以及混合感染性疾病的发生率，但是目前H9N2 AIVs诱发宿主免疫功能下降的机理仍不清楚。树突状细胞（DCs）是功能最强的专职抗原提呈细胞，是适应性免疫应答的始动细胞，也是多种病毒诱导宿主免疫应答失调的主要靶细胞，因此本项目对H9N2 AIVs感染所导致的鸡DCs功能调变进行了研究。结果显示，H9N2 AIVs可以感染鸡的树突状细胞并且能够在细胞内进行有效复制；与灭活的H9N2 AIVs抗原类似，H9N2 AIVs感染也可以诱发DCs表面MHC-I和mhc-II等表面分子的上调表达；与灭活的H9N2 AIVs抗原相比，H9N2感染对DCs的吞噬能力没有明显影响；而对于DCs抗原提呈能力的研究显示，与灭活的H9N2 AIVs抗原相比，H9N2 AIVs感染明显抑制了DCs对T淋巴细胞特别是CD8+ T淋巴细胞的激活能力。然后我们对H9N2 AIVs感染所导致的DCs转录组的变化用高通量测序技术进行了测定和分析，结果显示，H9N2 AIVs感染诱发了DCs先天性免疫应答相关通路的上调表达，但导致了抗原提呈相关通路特别是MHC-I类抗原加工与递呈相关通路基因的下调表达。最后我们通过DCs过继输回实验和动物感染实验对H9N2 AIVs感染对疫苗免疫应答的影响进行了研究，过继输回实验结果显示，H9N2 AIVs感染不仅降低了DCs对H9N2抗原特异性淋巴细胞的刺激活性，而且还降低了DCs对新城疫抗原特异性淋巴细胞的刺激活性；动物感染实验结果显示，H9N2 AIVs感染可显著抑制疫苗免疫后外周血T淋巴淋巴细胞的增殖活性以及IFN-γ的分泌能力。因此，体内实验结果同样说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡对疫苗的免疫应答能力，特别是MHC-I类分子限制性免疫应答能力。总之，我们的研究结果表明，H9N2 AIVs感染激活了DCs表面刺激分子的上调表达和先天性免疫应答，而抑制了DCs的抗原提呈能力，抑制了鸡的MHC-I类分子限制性免疫应答能力，这将有助于阐明H9N2 AIVs的免疫抑制机理，为H9N2禽流感的科学防控和新型佐剂和疫苗的研制提供理论基础。