能源植物续随子油体蛋白基因oleosin的克隆及其对三脂酰甘油积累的影响

前期工作基于油体蛋白结构域疏水区较保守的特点，通过生物信息学分析和PCR方法，从本课题组培育的续随子高油品种中克隆到两个与种子含油量有密切关系的油体蛋白基因片段，并以此构建了基因沉默载体。本研究拟利用RACE方法扩增蛋白编码序列，并在已建立的愈伤组织培养体系基础上，通过转基因和基因沉默技术，利用组成型表达启动子CaMV35S和油菜种子特异性表达启动子NapinA，分别驱动油体蛋白基因在续随子中进行过量表达；并利用这两个启动子驱动油体蛋白基因的表达沉默。经分子生物学方法筛选、鉴定得到各阳性植株后，提取油体，利用SDS-PAGE电泳和Western Blot分析油体蛋白的表达情况。利用气相色谱测定种子三脂酰甘油的脂肪酸组成及其积累量，解析油体蛋白基因oleosin表达与三脂酰甘油积累量之间的关系及其对三脂酰甘油的脂肪酸组成尤其是油酸含量的影响。本项目的实施将为高油能源植物的分子育种提供新视点。

大戟科植物续随子是一种很有潜力的能源植物，其种子中的脂肪酸可用于生产生物柴油。油体蛋白参与种子脂肪酸代谢过程。本项目首先克隆筛选了续随子内参基因，并以液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因验证了其作为内参的有效性；提取分离了种子油体，分析油体中脂肪酸组成；随后测定分析了种子提油后的籽粕中饲用概略营养成分及氨基酸组成；对续随子进行多组织转录组测序分析，获得了丰富的基因表达数据，并对4个油体蛋白oleosin基因进行了克隆与表达分析，为续随子的分子生物学研究及续随子资源的综合利用提供了参考。