重组AcMNPV-CfORC6对病毒滴度及细胞凋亡的影响

在分离鉴定云杉卷夜蛾DNA复制及有丝分裂相关蛋白CfORC6基础上，拟通过构建AcMNPV-CfORC6突变体重组病毒，使CfORC6突变体在细胞中过表达，干扰细胞DNA复制与分裂，促进重组病毒复制，在不减少病毒滴度的同时加快细胞凋亡。利用PCR技术构建CfORC6不同功能部位缺失的重组转座载体pFastBacTM-CfORC6，利用Bac-to-Bac系统获得不同重组AcMNPV-CfORC6病毒。以AcMNPV感染Sf9为对照，以CfORC6抗体为探针，利用Western blot检测重组病毒感染细胞后CfORC6突变体表达情况；利用终点稀释法及噬斑法测定不同重组病毒的滴度；利用荧光显微镜和流式细胞仪分析不同重组病毒引起细胞凋亡的时间和效率。探讨滴度高、诱导细胞凋亡能力强的重组病毒，并阐明其分子机制，为改良杆状病毒杀虫剂提供理论依据与技术支撑。