基于miR-192糖肾宁调控糖尿病肾病细胞外基质增生的研究

Diabetic nephropathy（DN）is one of the major cause of death among diabetic patients, the underlying mechanisms remain uncertain and there are no ideal methods. Based on our previous basic and clinical studies, we focused on an important mechanism of renal fibrosis: regulation of microRNA-192 and downstream effectors on accumulation of extracellular matrix(ECM). Western blot,realtime-PCR and immunohistochemistry were applied to detect genes transcription and protein expression of miR-192/TGF-β1 positive feedback circuit, key genes of extracellular matrix (Col1A2,Col4A1, CTGF, FN), downstream pathways (Akt/FoxO3a), extracellular matrix (Col-Ⅰ/Ⅳ，FN，LN) and MMP-9/TIMP-1 by Tangshenning intervention. We hope to fully explicate the mechanism of Tangshenning regulating on excessive accumulation of extracellular matrix in diabetic nephropathy based on miR-192 and explore the target at the level of whole,tissue and molecule. It could provide the scientific basis of Chinese medicine treatment on diabetic nephropathy.

糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者致死的主要原因之一，至今发病机制尚未完全阐明，临床防治缺乏有效的药物。本课题在以往临床及实验研究的基础上，采用国内外公认的自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠模型，针对DN肾纤维化的重要机制-miR-192及其下游效应分子对细胞外基质（ECM）增生的调控作用，采用Western blot、RT-PCR、免疫组化等技术，观察糖肾宁对miR-192/TGF-β1正反馈回路，miR-192调控的ECM关键基因（Col1A2、Col4A1、CTGF、FN）及下游通路（Akt/FoxO3a）, ECM成分(Col-Ⅰ/Ⅳ，FN，LN)及降解酶系（MMP-9、TIMP-1）基因或蛋白表达的影响，基于miR-192研究糖肾宁调控糖尿病肾病细胞外基质增生的作用机制，从整体，组织，分子水平阐明中药糖肾宁治疗DN的作用靶点和途径，为中药治疗DN提供科学依据。

糖尿病肾病 (Diabetic nephropathy, DN)是糖尿病最主要的微血管病变之一，也是终末期肾病的首要原因，至今发病机制尚未完全阐明，也无有效的药物。目前认为DN发病机制主要是多种因素综合作用的结果：糖代谢紊乱、糖基化终末产物增多，多元醇通路的活化、蛋白激酶C的激活、血流动力学异常、氧化应激、和细胞因子参与。DN以细胞外基质积聚(extracellular matrix, ECM)导致的肾小球硬化和小管间质纤维化为主要病理表现。.尽管DN发病受多种因素影响，但细胞因子参与、ECM降解酶系失常等导致的ECM积聚是DN进展，肾纤维化加重的主要原因。研究发现miRNA可通过调控胶原与纤维连接蛋白表达、系膜细胞增生、间充质细胞转分化及转化生长因子β1参与肾纤维化的发生和进展，与DN的发病密切相关。miR-192可直接调控TGF-β1促进细胞外基质增生，因此miR-192日益成为研究的热点。.本研究采用国内外公认的自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠模型，针对DN肾纤维化的重要机制细胞外基质增生，通过观察糖肾宁对miR-192/TGF-β1正反馈回路，miR-192调控的ECM关键基因及下游Akt/FoxO3a通路, ECM成分及降解酶系的影响，从整体，组织，分子水平阐明其部分作用机制。实验研究结果表明糖肾宁具有降低尿蛋白、保护肾功能，抑制2型糖尿病KKay小鼠肾纤维化的作用。其作用机制部分在于：1）通过调控MMP-9/TIMP-1蛋白及基因的表达，抑制DN肾组织细胞外基质增生；2）抑制肾组织miR-192 /TGF-β1正反馈回路及下游ECM关键基因、Akt/ FoxO3a通路，进而抑制DN肾组织细胞外基质增生及肾脏肥大。本研究为中药治疗糖尿病肾病提供实验依据，为中药防治糖尿病肾病的新药开发奠定基础。