细胞移植治疗帕金森病Nurr1基因调控的分子机制研究

Traditional dopamine treatment therapy on Parkinson disease，may alleviate the symptoms of Parkinson disease，while which could not stop the development of Parkinson disease.Stem cell transplantation is one of the most hopeful therapeutic methods for treatment of Parkinson disease.Based on our research before, We found that It is hard to survive in the local and the therapy efficacy is progressive loss through sole transplantation of neural stem cells ( NSCs ).So we choice the local micro environment as the research object,to study the molecular mechanism of Nurr-1 gene combination therapy on Parkinson's disease through neural stem cells and microglia cells.This paper focused on the Nurr1 neural stem cell transplantation and microenvironmental regulation, is the theory innovation, the completion of this research will provide cell transplantation in the treatment of PD provides a new train of thought.

帕金森病（PD）是由黑质致密部多巴胺（DA）神经元变性引起的一种神经退行性病变。传统的多巴胺替代疗法，只能改善症状而不能阻止病情发展。干细胞移植治疗是近年来被认为极有希望的治疗手段之一，然而其治疗机制尚不清楚。本研究在前期研究基础上，针对单纯移植神经干细胞（NSCs）后，在移植局部难以存活，随时间推移，疗效逐渐丧失为契机，选择局部微环境为研究对象，研究Nurr1基因对神经干细胞与小胶质细胞的调控及联合移植治疗帕金森病的分子机制。本课题聚焦于Nurr1在神经干细胞移植局部微环境的调控作用，是理论上的创新，本研究的完成将为细胞移植治疗PD提供新的思路。

目的：以NURR1的双重作用为切入点，研究过表达NURR1的小胶质细胞和神经干细胞联合治疗PD的作用，并初步阐明其分子机制。.方法：1. 解剖分离E14d大鼠胚胎腹侧中脑神经干细胞，以无血清培养液培养，观察其增殖、分化。对培养第三代的细胞进行干细胞特性和分化潜能的免疫细胞化学鉴定；2、取新生1天的SD大鼠大脑皮质，以DMEM/F12为培养基，到第九天采用震荡分离法粗略分离，再用流式细胞仪分选，成功养出大鼠小胶质细胞。3. 健康成年大鼠的黑质、内侧前脑束立体定向注射6-羟多巴胺(6-OHDA)，建立帕金森病大鼠模型；4. 将建立成功的PD大鼠随机分为六组：单独移植神经干细胞组；单独移植过表达NURR1的神经干细胞组；移植神经干细胞和小胶质细胞组；移植神经干细胞和过表达NURR1的小胶质细胞；移植小胶质细胞和过表达NURR1的神经干细胞；移植过表达NURR1的小胶质细胞和过表达NURR1的神经干细胞，采用立体定向技术将生长状态良好的神经干细胞或小胶质细胞移植至PD大鼠纹状体区。4．细胞移植后1，2，3和4周分别腹腔注射APO诱导大鼠偏侧旋转，观察各组PD大鼠的行为学改善情况。.结果：1．从E14大鼠胚胎的腹侧中脑可分离得到Nestin免疫阳性的神经干细胞，经体外诱导可分化为胶质细胞和神经元；2、从新生1天的大鼠大脑皮层成功分离大鼠小胶质细胞；3．成功建立PD模型大鼠。细胞移植后行为学评估结果显示：与对照组相比，移植过表达NURR1的小胶质细胞和过表达NURR1的神经干细胞组PD大鼠的异常旋转行为有显著改善；结论：过表达NURR1的神经干细胞和过表达NURR1的小胶质细胞联合移植可改善PD大鼠的异常行为，其机制与NURR1对炎症因子分泌的抑制作用以及促进神经干细胞向多巴胺神经元的分化作用有关。