大肠癌转移肿瘤干细胞分子标记物的筛选与功能研究

Impact of colorectal cancer metastasis is a major factor in the prognosis of patients. New theory demonstrated that cancer metastasis was a result from MCSC(migrating cancer stem cells) migration. Based on previous research work, we will use Side Population method and Cell-surface Marking method, respectively, to select CSC from metastatic carcinoma in lymph nodes of colorectal cancer. Furthermore, we will detect tumorigenicity in nude mice and Transwell experiment to mimic cancer metastasis in order to screen high-metastasis MCSC. Using the high-metastasis MCSC, we will observe its function on apoptosis, growth and proliferation et al. Additonally, we will do DNA microarray to find differentiation genes. Consequently, we will verify the function of the differentiation genes using siRNA/over-expressin method and to inqure metastasis-related mechanism. Our research work will provide the theoretical basis for metastasis and treatment of colorectal cancer.

癌转移是影响大肠癌患者预后的主要因素。新的理论认为，肿瘤转移是转移肿瘤干细胞（MCSC）发挥作用的结果。基于以往的研究工作基础，课题组拟分别用表面标记法和SP法分选出人大肠癌淋巴结转移癌中的CSC，并通过裸鼠成瘤、TRANSWELL小室进一步动态模拟肿瘤转移，筛选出高转移性的MCSC。再采用原发癌细胞和其中分选出的CSC作为对照，对MCSC进行细胞增殖、凋亡、细胞粘附和聚集等功能研究，深入探讨其生物学特性；另对其进行基因表达谱芯片分析，找出其差异表达基因，并运用基因沉默或过表达方式对候选基因进行功能验证，探寻与大肠癌转移相关的因素和作用机制，为大肠癌转移的发生和诊治提供理论依据。

大肠癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，转移是大肠癌患者预后不良的主要因素。新的理论认为，肿瘤转移是转移肿瘤干细胞（MCSC）发挥作用的结果，并已在几种恶性肿瘤中得到证实。本课题选用3个细胞株和9例根治切除的新鲜人大肠癌原发灶和淋巴结转移癌组织作为实验材料，经肿瘤球立体培养和原代培养后分选肿瘤干细胞（Cancer Stem Cell，CSC）及转移肿瘤干细胞（Migrating Cancer Stem Cell，MCSC）；建立裸鼠结肠癌原位种植转移模型，模拟大肠癌动态转移过程富集MCSC；利用二代测序、lncRNA芯片和mRNA芯片检测技术及相关生物学分析方法，筛选出与大肠癌转移及转移干细胞相关的多个基因、lncRNA和mRNA；继之通过细胞生物学实验证实了其参与大肠癌转移的过程；同时使用大肠癌患者术前与术后血清进行蛋白芯片检测，对比有淋巴结转移癌患者与无淋巴结转移者的蛋白差异表达情况，并以ELISA实验进行了验证。此研究利用目前最先进的多种实验方法，较全面地筛选并验证了大肠癌转移相关的分子标记物，丰富了有关癌症复发和转移相关机制的探讨，为大肠癌转移的监测、预后评估以及靶向治疗提供了新的思路和策略。