按揉法调控TGF-β1/ CTGF作用途径干预骨骼肌纤维化的作用及机制研究

Massage therapy clinical efficacy of skeletal muscle fibrosis significantly, such as congenital muscular torticollis, chronic muscle injury, but the mechanism of action is unknown. This project takes the process of skeletal muscle fibrosis as the breakthrough point and based on the TGF-β1 / CTGF pathway to investigate the mechanism of manipulation. Intends to replicate in animal models of skeletal muscle fibrosis, use masson trichrome staining to observe the degree of muscle tissue fibrosis, use electron microscopy to observe the structure and morphology of muscle cells and myofibroblasts, use duble immunofluorescence and Tunel to detect the number of cells and apoptosis, use PCR ,Western Blot and immunofluorescence to detect TGF-β1 and CTGF expression and distribution. In order to understand the role of massage intervention targets disorders of skeletal muscle fibrosis and integrated indicators to test the hypothesis, that manual stimulation may through reduced expression of TGF-β1 and CTGF, inhibited myofibroblast proliferation, and directly promoted myofibroblast apoptosis, thereby reducing the synthesis of extracellular matrix, control of tissue fibrosis development. This project will help to clear therapeutic target, expand Tuina in the treatment of diseases, and have the promotion to develop Tuina subject.

推拿干预先天性肌性斜颈、慢性肌肉损伤等骨骼肌纤维化疾病效果显著，但其作用机制未明。本项目以骨骼肌纤维化病理进程为切入点，立足于TGF-β1/CTGF作用途径，探讨推拿手法干预该类疾病的作用机制。拟复制骨骼肌纤维化动物模型；以Masson三色染色法观察组织纤维化程度；电镜技术观察肌细胞、肌成纤维细胞结构形态；应用免疫组化技术，检测肌成纤维细胞的数量及凋亡情况；采用荧光定量PCR、Western Blot检测TGF-β1、CTGF的表达；进而明确推拿手法干预骨骼肌纤维化的作用靶点，综合各项指标验证假说：手法刺激可能通过减少TGF-β1/CTGF的表达，抑制肌成纤维细胞增殖，同时直接促进肌成纤维细胞的凋亡，从而减少细胞外基质的合成，控制组织纤维化发展，进而干预骨骼肌纤维化的作用机制假说。本项目有助于明确治疗靶点，扩大手法治疗病种，为推拿疗法在临床上更广泛的推广应用提供依据。

骨骼肌纤维化是多种软组织疾病的共同病理变化，其纤维化程度严重影响着患者的关节活动范围，进而影响了生活质量。而推拿手法干预先天性肌性斜颈、肌肉损伤等骨骼肌纤维化疾病效果显著，但其作用机制未明。为明确推拿治疗骨骼肌纤维化的作用机制，本项目以骨骼肌纤维化病理进程为切入点，立足于TGF-β1/CTGF作用途径，以骨骼肌纤维化大鼠为研究对象，以Masson三色染色法观察观察推拿治疗组与模型对照组和空白对照组组织纤维化程度的差别；以电镜技术观察推拿对肌细胞、肌成纤维细胞结构形态的影响；同时应用免疫组化技术，检测肌成纤维细胞的数量及凋亡情况；采用荧光定量PCR、Western Blot检测与肌肉纤维化密切相关的生长因子TGF-β1、CTGF的表达，以期明确推拿手法干预骨骼肌纤维化的作用靶点，验证假说：手法刺激可能通过减少TGF-β1/CTGF的表达，抑制肌成纤维细胞增殖，同时直接促进肌成纤维细胞的凋亡，从而减少细胞外基质的合成，控制组织纤维化发展，进而干预骨骼肌纤维化。.本研究以大鼠腓肠肌钝挫伤为模型，采用推拿按揉手法为干预方法，研究发现：推拿手法能够促进骨骼肌的再生，减少肌胶原纤维的沉积，减少基质纤维化（HE染色、Masson染色）；模型对照组中发现较多的成纤维细胞，当给与推拿手法干预后，成纤维细胞数量减少，同时发现成纤维细胞有凋亡存在（荧光双染）；同时电镜下观察可见模型对照组组存在肌成纤维细胞；推拿干预后，TGF-β1与CTGF的表达能够被显著下调（实时定量PCR、Western blot）。结论：推拿通过抑制TGF-β1/CTGF信号通路减轻细胞外基质纤维化。