柚类色谱指纹图谱与原产地鉴别及质量控制技术体系研究

我国是世界上生产面积最大、产量居第2位的柚类生产大国，已形成一批名优柚类品牌。柚类的质量与其原产地密不可分，急切需要一种可靠、快速的柚类原产地鉴别技术并建立质量控制体系，填补国内空白。本研究借鉴中药指纹谱图与质量控制技术与经验，首次提出对我国柚类从果皮、果肉及籽粒内涵物的提取、分离，采用HPLC-UV、HPLC-DAD、HPLC-ESI-MS/MS、GC、GC-MS及IR等多种检测方法、分析仪器联用，结合质谱多级离子碎片解析及精确质量数软件等分析手段对物质进行定性定量分析，建立不同品种、不同产地的柚类果实化学指纹谱图库和数据库。结合化学计量学理论进行产地判别分析（DA），建立判别方程模型，建立科学、快速的柚类原产地识别技术体系，建立和完善我国柚类地理标识相关标准及鉴别技术。将柚类指纹图谱、内涵物定性定量鉴定与品质、风味相结合来控制名优柚类品种的质量，从有效物质群整体性层面建立质量评价体系。

本项目2012年1月至2014年12月，研究期限3年，本项目试图通过色谱检测的方法从柚类不同部位内涵物质的种类、数量、特征性物质含量等重要参数上确定柚类不同品种、不同产地间的差异性来，得到不同产地柚类间的色谱指纹谱图，并以此对品种、产地进行色谱指纹识别。. 项目实施首先广泛地在我国柚类各代表性主产区进行田间样本的采集，保证样本来源的代表性，共采集我国6个省份24个不同采样点柚子，然后进行样品实验室处理方法开发，对比了乙腈、甲醇、乙酸乙酯、正己烷等不同极性的提取溶剂对柚类内涵物的提取效率，结果发现乙腈提取液出峰数最多且提取效率最高，提取物质种类及数量稳定，确定采用乙腈作为提取溶剂，辅助以超声辅助的提取方法。. 分别采用气相色谱-质谱法（GC-EI-MS）、液相色谱-二极管陈列检测器（HPLC-DAD）、液相色谱—离子肼质谱（HPLC-ESI-IT）、液相色谱-三重四极杆质谱（HPLC-ESI-QQQ）等大型仪器对柚类不同品种、不同部位的内涵物进行定性分析及结构确定，确定不同品种、同一品种不同产地间在不同部位（分别包括外表皮、内表皮、内果皮、果肉、种子）的特征性物质，从物质种类定性上进行指纹识别的研究，采用与标准谱库进行比对、与发表文献进行确证，对每一个质谱峰进行碎片结构推导等方法，初步确定柚类不同部位上述所有内涵物质的结构及名称，并采用了努特卡酮、软脂酸、α-亚油酸、蛇床子素标准品进行相同条件下的比对及定性结果确证。. 最后采用GC-EI-MS、GC-FID等色谱方法对不同品种、不同部位的内涵物全组分进行分析，分别从色谱峰数、每个峰的峰面积百分比等参数上探索柚类在色谱定量结果上差异，最终建立了不同品种、同一品种不同产地间在不同部位的色谱指纹，为色谱指纹谱图在柚类品种鉴定及产地识别中的应用打开了良好的开端。