调控人类CYP3A4基因表达的miRNA的筛选和验证

CYP3A4(Cytochrome P450 3A4)是人类最重要的I相药物代谢酶，它参与了50%以上临床药物的代谢，它的酶活性存在很大个体差异，这种差异的90%源于遗传因素。目前已经确定了CYP3A4有40个等位基因(包括单倍体型)，但它们绝大多数的频率低于5%，现有已知功能位点对酶活性的影响均有限，仅能解释5-10%的个体差异。生物信息学研究显示CYP3A4基因的3'-UTR含有多个miRNA 的靶序列，前期预试验也证明了生物信息学的预测结果，因此miRNA很可能参与了CYP3A4基因的表达调控并起重要作用。因此，本课题拟以生物信息学和荧光素酶报告基因技术挖掘参与CYP3A4基因调控的重要miRNA ，并研究miRNA对CYP3A4 mRNA、蛋白和酶活性的影响，确认参与CYP3A4表达调控的miRNA，为揭示CYP3A4产生个体差异的机制和个体化给药提供新的策略和方法。

CYP3A4是人类最重要的I相药物代谢酶，参与半数以上临床用药的体内代谢过程。CYP3A4的表达存在显著的个体差异，现有基因变异的研究结果不能充分解释CYP3A4的个体化差异，因此这种差异的产生可能与miRNA介导的转录后调控有关。我们通过软件预测获得了108种候选miRNA，其中22种通过了体外细胞学验证，进而的在体试验结果显示，hsa-miR-660、hsa-miR-577、hsa-miR-1、hsa-miR-532-3p和hsa-miR-627等可显著下调人类肝脏组织中CYP3A4 mRNA的翻译效率，该研究结果有助于揭示人类肝脏内CYP3A4表达的调控机制。