拟态弧菌OmpU多表位嵌合体的构建、表达与免疫特性研究

鱼蟹类腹水病是一种由拟态弧菌引起的危害严重的疾病，但目前该病尚无有效的免疫防治方法。对此，本项目拟选择暴露于细菌表面、保守性好且与细菌黏附密切相关的外膜蛋白OmpU作为研究靶蛋白。首先应用分子生物学软件分析OmpU蛋白，通过二级结构、亲水性、表面可能性、柔韧性和抗原指数等多参数,预测界定OmpU蛋白优势抗原表位。其次以优势抗原表位序列设计和优化3个多表位嵌合基因。利用基因工程技术将多表位嵌合基因插入融合表达载体pGEX-4T-1的BamHⅠ和EcoRⅠ位点间，构建多表位嵌合基因重组质粒，并进行原核表达。最后采用免疫学实验测定多表位融合蛋白的抗原性、免疫保护性和诱导实验鱼产生免疫应答的水平以及多表位融合蛋白抗体的黏附抑制性，以鉴定获得特异有效的多表位嵌合体作为黏附素多表位疫苗靶位。本项目的预期研究结果不仅为研制OmpU多表位基因工程疫苗奠定了基础，也对提高水产养殖业的经济效益具有重要意义。