左金丸通过NF-κB调节JNK/SOX2信号通路抑制大肠癌干细胞耐药的作用机制

Cancer stem cells are recognized to be the origin of cancer and a major failure cause of chemotherapy. Our previous study found that activation of JNK signaling pathway can mediate the occurrence of multidrug resistance in colorectal cancer, ZuoJinWan reversed drug resistance via inhibiting NF-κB pathway. But the regulatory mechanism is unclear..It has been confirmed that c-Jun/AP-1, which is the downstream of JNK signaling pathway, could induce AP-1 to active SOX2 gene transcription when its dimer were disaggregated; NF-κB signaling pathway is also in response to the MKPs kinase phosphorylation which is belong to JNK upstream. Therefore, we hypothesized that NF-κB may be the reason that AP-1/c-Jun/SOX2 signaling pathway madiated drug resistance in colorectal cancer. In this study, we explore the effect of Zuojinwan in NF-κB/JNK/SOX2 signaling mediated drug resistance in colorectal cancer stem cell, through the colorectal cancer stem cell model, CRISPR/Cas9, and other experimental technology. We will use in vivo and in vitro model, even clinical tissue. This study of ours will not only elucidate the therapeutical mechanism of ZJW, but also define novel treatable targets for TCM in CSC.

肿瘤干细胞是具有“种子”能力的癌细胞，其对药物的抗药性是化疗治疗失败的主要原因之一。我们前期研究发现JNK信号通路的激活能够介导大肠癌多药耐药的发生，左金丸通过抑制NF-κB逆转大肠癌耐药，但是以上两者的调控机制尚不清楚。.已有研究证实JNK信号通路下游c-Jun/AP-1二聚体的解离，被释放的AP-1是引起SOX2基因转录的重要因素之一；NF-κB参与了JNK信号通路上游MKPs激酶的磷酸化。因此，我们推测NF-κB可能是调控c-Jun/AP-1/SOX2信号通路介导的大肠癌耐药的重要途径之一。本研究通过建立大肠癌干细胞模型，采用CRISPR/Cas9等实验技术，进行临床组织标本、体内动物转移模型、体外细胞实验研究，探讨左金丸对NF-κB/JNK/SOX2信号传递介导的大肠癌干细胞耐药的调控机制。这对于揭示中药抗大肠癌耐药的作用途径，明确中药防治大肠癌侵袭转移的作用靶点具有重要的科学意义

肿瘤干细胞是具有“种子”能力的癌细胞，其对药物的抗药性是化疗治疗失败的主要原因之一。与其他肿瘤干细胞相比，结肠癌腺瘤干细胞分裂次数首屈一指，正常结直肠癌隐窝细胞数为2X103，癌变时可指数增至108-1010，而此变化是由其中约1%的肿瘤干细胞引起的。因此，大肠癌干细胞不仅是大肠癌细胞产生的源头，更是肿瘤耐药和复发转移的根源。.课题组前期研究发现JNK信号通路的激活及NF-κB核转录能够介导大肠癌多药耐药的发生。此外，动物实验数据显示左金丸通过增加化疗药对大肠癌裸鼠皮下移植瘤的抑制效果，逆转大肠癌耐药，但是以上两者的调控机制尚不清楚。.因此，本研究通过收集临床大肠癌手术组织标本，筛选癌组织和癌旁组织之间表达差异明显的蛋白分子；通过生物信息学分析，以多药耐药为方向，发现SOX2的异常表达和PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活密切相关。体外细胞实验也提示，大肠癌细胞中PI3K/Akt信号通路的激活能够促使NF-κB的泛素化降解，从而进入细胞核内，启动IκB等转录因子的转录，诱导大肠癌细胞耐药。.本研究通过建立大肠癌干细胞模型，采用CRISPR/Cas9等实验技术，观察左金丸对大肠癌干细胞干性因子表达的调节作用，以及对大肠癌耐药的影响。发现左金丸能够降低干性因子的表达，降低肿瘤干细胞SOX2、Oct4等蛋白的表达，增加化疗疗效。采用体内大肠癌耐药模型、体外细胞实验研究，发现左金丸能够通过降低大肠癌干细胞SOX2的表达，从而抑制细胞内PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活，逆转耐药。这对于揭示中药逆转耐药的作用机制，为中医药防治大肠癌复发转移提供科学依据。.标注该课题的文章8篇，其中SCI收录5篇。授权国家发明专利1项，培养硕士研究生2名。