胰腺星状细胞在胰腺管状腺癌血管生成中的作用

胰腺管状腺癌（PDAC）危害严重、预后极差。血管生成对于包括PDAC在内的众多肿瘤发展有重要意义。胰腺星状细胞（PSC）是PDAC细胞外基质(ECM)的主要来源，在PDAC状态下，PSC发生活化，产生一系列相关因子，为肿瘤细胞的生长提供一个有利的微环境。PSC在PDAC血管生成方面是否发挥作用？其具体机制如何？以上问题迄今尚无系统研究。本课题针对肿瘤血管生成的主要环节- - -增殖、迁移和管道形成，拟在离体和活体水平，观察检测PSC在PDAC血管生成中的作用，明确PSC产生的血管生成相关因子，进一步运用相应的中和抗体、激酶抑制剂等阻断其作用，观察血管生成情况的变化，进而探讨PSC影响PDAC血管生成的具体机制，为将来实现在细胞水平上干预阻断胰腺癌血管生成提供新的理论和实验依据。

背景：学界已广泛认同胰腺星状细胞（pancreatic stellate cells, PSCs）是胰腺癌细胞外基质的主要来源。迄今为止，PSC在血管生成中的作用尚不清楚。本课题拟选取人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC），观察PSC、胰腺癌细胞（pancreatic carcinoma cells, PCCs）以及它们相互作用后对于血管生成的影响。.方法：1. 将PSC及PCC分别单独培养和共培养，收集上清液后加入HUVEC。（1）通过核素掺入法及PI/Hoechst染色法检测HUVEC增殖及凋亡情况；（2）通过单细胞追踪法和Boyden迁移小室模型检测HUVEC迁移情况；（3）将HUVEC接种于细胞外基质胶上，观察管道形成情况。采用鸡绒膜尿囊膜（Chick chorioallantoic membrane assay, CAM)模型，将上述收集的上清接种于CAM，观察CAM血管生成情况。3. 采用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）在上述上清液中的表达，选用MMP抑制剂GM6001作用于HUVEC，了解其细胞迁移指标的变化情况。选用VEGF抑制剂Axitinib和PDGF抑制剂Tyrphostin AG 1296分别作用于HUVEC，了解细胞增殖/凋亡、迁移及管道形成变化以及CAM模型血管生成变化情况。.结果：（1）PSC及PCC均能促进HUVEC增殖及减少凋亡；（2）PSC及PCC均能促进HUVEC迁移且效应呈剂量依赖性，PSC/PCC共培养对促进迁移显现出协同效应；（3）PSC能促进HUVEC的管道形成；（4）PSC及PCC均能促进CAM模型的血管生成，共培养上清液似乎作用更强；（5）PSC/PCC共培养上清液较单独培养表达更高浓度的MMP2，在PSC单独培养或PSC/PCC共培养体系下，MMP抑制剂能够抑制上述条件下的HUVEC迁移。（6）VEGF抑制剂能够抑制PSC作用条件下的HUVEC增殖、迁移、管道形成及CAM血管生成；PDGF抑制剂在上述条件下仅能抑制HUVEC增殖和迁移。.结论：PSC及PCC能够促进胰腺癌的血管生成，尤其是共培养条件下对某些指标能起协同作用。MMP、VEGF及PDGF参与了胰腺癌血管生成的某些环节。