精原干细胞介导Mx基因生产抗病转基因鸡的研究

利用分子生物学技术对家禽抗病基因的筛选已成为国际社会控制危害的一个难点和热点。本项目的研究目的在于拟对我国著名的地方鸡种狼山鸡的Mx基因体外分离、重组、克隆之后。利用诱导定点突变基因或重叠延伸剪接技术将密码子AGG或AGT替换为另一密码子AAT，使鸡Mx 基因第631 位的天冬酰胺(Asn) 替代丝氨酸(Ser)；构建可转染到家禽细胞并能持续稳定表达有抗病毒活性Mx 蛋白的表达载体；在建立的体内精原干细胞转染外源DNA方法的基础上，进一步研究是否能够多次转染、转染效率和转染条件的优化等，在离体条件下研究比较不同转染方法对精原干细胞的转染效率以及转染细胞的筛选、纯化、移植等问题；研究体内外精原干细胞转染外源基因生产转基因鸡这一途径的有效度，将填补国内外利用鸡精原干细胞转染同种异体改造基因进行禽类转基因研究的空白，为禽类免疫提供一种新的选择思路。