孤核受体RORa在褪黑激素促进绒山羊绒毛生长中作用的研究

褪黑激素能够促进绒毛生长，但其信号通路及调控机理尚不清楚，也未见相关报道。本课题组已通过原位杂交、荧光实时定量PCR等技术在绒山羊不同月份皮肤中检测到了RORα的表达，并且不同月份存在动态变化，可推测褪黑激素促进绒毛生长是通过孤核受体RORα来发挥其功能的。在此基础上本项目拟通过在体外培养毛囊过程中添加褪黑激素、RORα受体抑制剂及转染RORα干涉片断和在体内埋植褪黑激素、注射受体抑制剂两条途径来进一步深入研究褪黑激素浓度、孤核受体RORα与产绒性能之间的关系，阐明RORα在褪黑激素促进绒毛生长中的作用，为实现人工调控绒毛生长时间和绒毛产量打下基础，对提高内蒙古绒山羊绒毛产量和品质具有重要指导意义。

褪黑激素能够促进毛皮动物的绒毛生长、提高毛皮的产量和质量。 前人通过春季给绒山羊皮肤埋植褪黑激素，可实现一年内山羊绒生长两次，而且埋植组的绒产量高于对照组，但其作用机理尚不清楚，也未见相关报道。因此，本项目通过在体外和体内两条途径来深入研究褪黑激素浓度、孤核受体RORα与产绒性能之间的关系，阐明RORα在褪黑激素促进绒毛生长中的作用。.主要研究内容和重要结果：.1 在体外培养生长期毛囊过程中通过添加褪黑激素（MT）与对照试验，观察培养1-7天毛囊的形态和生长的变化，结果表明，褪黑激素对绒山羊初级毛囊生长的促进作用极显著。最终选择酶消化的最适浓度和时间为0.3%，60min。.2 在体外培养的毛囊中，一组继续添加MT、一组为对照组，对毛囊进行连续7天的体外培养，通过毛囊转录组测序分析，从中筛选出Wnt10b、catenin、SFPR1、TCHHL1和FGF21五个与褪黑激素相关的影响毛囊发育的基因，之后进行活体验证。.3 选择纯种内蒙古绒山羊周岁母羊12只，随机分成2组，对照组和埋植MT组，采集12个月份羊的血液和皮肤组织，利用放射性免疫法检测血液中褪黑激素的浓度，发现血浆中褪黑素含量埋植组约为对照组的10.42倍，方差分析结果表明，埋植组极显著的高于对照组(P<0.01)。.采q-PCR检测不同月份试验组与对照组中RORα以及筛选出的5个基因在皮肤毛囊中核酸水平的表达，catenin、SFPR1、TCHHL1和Wnt10b差异显著，FGF21组间差异不显著，组内有差异。.采用免疫组化检测，实验组3个时期的初级毛囊和次级毛囊RORa蛋白均在毛囊的外根鞘和毛乳头表达，而对照只在外根鞘表达，毛乳头没有表达。.western blot结果显示，RORa蛋白表达量实验组均大于对照组，在12月份差异表达最为明显。.4 对休止期的埋植组和对照组的山羊皮肤拔毛囊，进行转录组测序分析，筛选出BMP2和TGFβRII与褪黑激素相关的基因，作为今后研究的候选基因。.5 在成纤维细胞培养中，一组添加MT，一组对照，然后分别对两组细胞转染RORα干涉片段，利用q-PCR检测试验组与对照组中RORα核酸水平的表达变化,干涉前后差异显著。.通过上述研究，阐明褪黑激素、RORα表达与毛囊生长之间的关系，从而探讨RORα在褪黑激素促进绒毛生长中的作用机理，对提高绒山羊绒毛产量具有重要指导意义。