节律调控分子Rev-erbα调节肥大细胞功能诱发斑块破裂的机制研究

动脉粥样硬化斑块破裂是急性心血管事件发生的最主要病因，具有昼夜节律性（晨起高峰现象）和突发性的临床特点，但节律是否可调节斑块破裂及其机制未明。在斑块突然破裂中扮演重要角色的肥大细胞，其激活脱颗粒受节律基因的调节。我们前期研究发现：重要节律调控分子Rev-erbα与儿茶酚胺对肥大细胞的激活密切相关。为此，提出"Rev-erbα可通过调控儿茶酚胺对肥大细胞激活，进而诱发斑块破裂"的假说。我们首先在小鼠骨髓来源肥大细胞上，采用siRNA等分子生物学手段，观察和探索Rev-erbα对儿茶酚胺刺激下肥大细胞激活和节律系统的影响及机制，随后在小鼠背部皮肤渗透性在体模型上进一步验证，最后应用apoE基因敲除小鼠颈动脉易损斑块破裂模型，通过局部转染Rev-erbαshRNA慢病毒系统明确其在触发斑块破裂中的作用。深入的研究不但有助于揭示诱发斑块破裂的新机制，而且会为今后临床干预治疗提供新方法和新靶点。

动脉粥样硬化斑块破裂是急性心血管事件发生的最主要病因，具有昼夜节律性（晨起高峰现象）和突发性的临床特点，但节律是否可调节斑块破裂及其机制未明。在斑块突然破裂中扮演重要角色的肥大细胞(MCs)，其激活脱颗粒受节律基因的调节。我们前期研究发现：重要节律调控分子Rev-erbα与儿茶酚胺对MCs的激活密切相关。为此，提出“Rev-erbα可通过调控儿茶酚胺对MCs激活，进而诱发斑块破裂”的假说。为验证该假说，我们首先取行颈动脉内膜剥脱术患者的颈动脉斑块，甲苯胺蓝染色及激光扫描共聚焦显微镜观察斑块内MCs和晚期糖基化终产物（AGEs）的分布情况。然后，在小鼠骨髓来源MCs模型上，给予不同浓度的晚期糖基化终产物修饰的低密度脂蛋白（AGE-LDL）刺激分化成熟的MCs，分别检测其释放组胺及 β-己糖胺酶水平，评价AGE-LDL刺激骨髓来源的MCs活化脱颗粒的能力。并通过siRNA沉默Rev-erbα基因和敲除MCs的TLR4基因，以及分别用NF-κB、p38、ERK1/2抑制剂PDTC、SB203580、PD98059预孵MCs后，再给予AGE-LDL刺激，观察细胞释放组胺和β-己糖胺酶的情况，进一步验证Rev-erb α-TLR4-ERK1/2和NF-kB信号通路在其中的作用。.本项目的主要研究实验结果：1、分析人颈动脉粥样硬化斑块标本，可见斑块内MCs浸润以及AGEs沉积。2、AGE-LDL能激活MCs，促进其释放组胺和分泌炎性介质，并证实其机制可能与ERK1/2和NF-kB信号通路相关；3、在AGE-LDL激活MCs这一病理过程中，TLR4表达显著上调，在TLR4受体敲除MCs模型上，也进一步验证了TLR4受体在其中起到重要作用;4、AGE-LDL能激活MCs可引起节律基因关键调控因子Rev-erbα上调，TLR4受体敲除后或给予Rev-erbα siRNA及相关通路的抑制剂后，MCs激活效应显著下降。.研究结论：AGE-LDL能够引起MCs节律紊乱，激活MCs脱颗粒，该作用由TLR4介导，并与p38MAPK、ERK1/2和NF-κB信号通路的激活相关。AGE-LDL对MCs脱颗粒活性的影响可能是导致糖尿病患者易患AS和易发急性心血管事件的重要病因之一，且可能解释动脉粥样硬化斑块破裂这一急性心血管事件具有昼夜节律性（晨起高峰现象）和突发性等临床特点的机制。