利用piggyBac转座子系统介导的基因转移技术提高精子载体法制备转基因猪效率的研究

转基因猪在猪育种和生物医药领域都有广泛而重要的应用价值.在目前已建立的几种转基因猪制备方法中,精子载体法最具应用潜力,因为其具有操作简单、成本廉价等优点.但用此法制备转基因猪的效率普遍很低,有些实验室甚至报道用此法不能成功获得转基因猪.导致这种情况产生的一个重要原因是在用精子载体法制备转基因猪时,通过与精子共孵育后进入精子内的外源基因整合到精子基因组，或经人工授精后产生的受精卵基因组的效率很低.piggyBac转座子系统最近已被证明可以介导外源基因高效地主动整合到宿主细胞基因组.目前，还没见有报道用piggyBac转座子系统介导的基因转移技术来提高转基因猪制备效率的。本项目将首次把piggyBac转座子介导的基因转移技术与精子载体法结合，通过子宫内人工授精和体外受精分别制备转绿色荧光蛋白基因猪和囊胚,研究piggyBac转座子系统介导的基因转移技术对提高精子载体法制备转基因猪效率的作用。

转基因猪在猪育种和生物医药领域都有广泛而重要的应用价值，但目前转基因猪制备的效率仍然很低，其原因主要是在制备转基因猪过程中外源基因整合到猪基因组的效率很低。piggyBac 转座子系统最近已被证明可以介导外源基因高效地主动整合到哺乳动物基因组。目前还没见有报道用piggyBac 转座子系统介导的基因转移技术来提高转基因猪的制备效率。本项目首次把piggyBac 转座子介导的基因整合技术分别与精子载体法、体细胞克隆法及受精卵胞浆DNA注射法结合来制备转绿色荧光蛋白基因（EGFP）猪和胚胎，研究piggyBac 转座子系统介导的基因转移技术对提高转基因猪制备效率的作用。结果显示piggyBac 转座子系统介导的基因整合技术虽然不能提高精子载体法制备转基因猪的效率，但将piggyBac 转座子系统介导的基因整合技术与体细胞克隆法及受精卵胞浆DNA注射法分别结合，可以成功制备转绿色荧光蛋白基因（EGFP）猪，并且piggyBac转座子质粒与普通的转基因质粒相比，可以显著提高体细胞克隆法及胞质DNA注射法制备转基因猪的效率，从而建立了两种高效而操作简单的转基因猪制备技术，为促进转基因猪技术在猪育种与生物医药领域的应用提供基础技术支撑。本项目不但完成了原研究计划，同时还进行了部分扩展研究。项目实施过程中本项目主持人以第一作者或通讯作者发表了与研究内容相关的国际会议论文一篇，SCI收录论文2篇，以第二申请人申请相关发明专利1项，较好地完成了项目研究任务和目标。