核素靶向示踪肿瘤新生血管作用位点研究

[摘要]：肿瘤新生血管显像是目前肿瘤研究的一个重要方向，其科学关键问题是如何获得特异性的靶向肿瘤新生血管示踪剂。在我们前期实验中发现放射性核素标记的小分子肽片段精氨酸-精氨酸-亮氨酸（RRL）能靶向与肿瘤新生血管组织特异结合。本研究拟进一步探索RRL与肿瘤来源内皮细胞的结合机制，明确RRL在肿瘤来源内皮细胞上的结合位点是否为血管内皮生长因子受体亚型2（vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2），以及二者特异结合的方式，探讨放射性核素标记的RRL作为抗侵袭力强的肿瘤新生血管显像剂及靶向生物治疗载体的可行性，从而建立一种新的肿瘤核素分子功能诊断及靶向治疗的新方法。

本课题完成情况良好，课题组成员采用绿色荧光素（FITC）标记RRL,并进行体外细胞结合实验，通过激光共聚焦显微镜中荧光信号观察RRL在不同VEGFR-2表达量的细胞中结合RRL的能力，结果显示RRL不仅能够特异性结合于肿瘤来源的血管内皮细胞，而且能够与肿瘤实质细胞大量结合。肿瘤来源内皮细胞高表达的VEGFR-2蛋白可能不是RRL靶向作用于血管内皮细胞的唯一配体。同时，体内分布及显像实验结果显示，131I-RRL在注药后24h于肿瘤组织明显浓聚且显影清楚，以上结果说明放射性核素标记的RRL作为肿瘤血管靶向显像剂的应用前景十分明确。. 另外，本课题组在放射性碘标记RRL研究结果的基础上，使用更适于临床上应用的放射性核素锝[99mTc]标记，进一步拓展其应用，课题组成员使用一步法对锝标记RRL结构重新设计和合成，标记率达到76.9%64.5% (n = 6) ，放化纯超过96%，体外稳定性良好。荷HepG2小鼠的生物分布实验显示99mTc-RRL血液清除率快，主要聚集在肿瘤组织及肾脏。靶/非靶的比值理想，其中肿瘤/肌肉为6.5，肿瘤/肝脏为1.98，肿瘤/血液为1.95，其中肿瘤/肌肉的比值可与18F-FDG相媲美。SPECT显像显示注射99mTc-RRL后2-6h肿瘤组织清晰可见，而阻断组则未见显影。99mTc-RRL特异性好，注射99mTc-RRL的荷瘤小鼠肿瘤组织的放射性摄取明显高于注射游离99mTc(p<0.05).肿瘤的大小与99mTc-RRL摄取程度成正相关的线性关系（R2 = 0.821）。以上结果说明放射性核素标记的RRL作为肿瘤血管靶向显像剂的应用前景十分明确。