病毒载体介导BDNF过表达对前庭毛细胞和神经支配的保护作用

眩晕是临床上常见症状，内耳前庭功能障碍是其重要原因之一。前庭性眩晕与前庭毛细胞和神经支配受损密切相关。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)在前庭毛细胞和神经元发育与分化过程中有重要作用，但BDNF是否对前庭毛细胞损伤后神经突触、神经纤维和前庭神经节神经元的保护作用尚不明确。我们前期已成功建立了链霉素所致前庭损伤的小鼠模型。在本研究中，我们拟采用基因治疗方法，来探索BDNF过表达对小鼠前庭毛细胞和神经支配的保护作用。我们首先通过对比不同病毒载体对小鼠前庭的转染特性，筛选出前庭基因治疗研究的最佳载体，并研究其介导BDNF在小鼠内耳过表达的可行性；然后探讨BDNF过表达对链霉素所致前庭毛细胞和神经支配损伤的拮抗作用，以及对损伤后神经支配的保存作用，为今后前庭基因治疗研究奠定基础，也为临床预防和治疗前庭疾患引起的眩晕提供新思路。

前庭功能障碍是眩晕的一个重要原因，其发生与前庭毛细胞及其神经支配受损密切相关。基因治疗是保护前庭毛细胞和神经支配免收损伤或者促使其再生的一种有效方式。作为基因治疗的一种常用载体，腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）具有能长期表达目的基因且免疫毒性低的独特优势。在本研究中，首先我们将5种不同血清型的AAV载体（AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8）通过半规管注射的方式导入成年小鼠前庭，通过对比各自的转染特性，筛选出AAV8为小鼠前庭基因治疗的理想载体；然后我们构建了携带BDNF的AAV8病毒载体（AAV8-BDNF-EGFP），并成功转染小鼠前庭感觉上皮，使BDNF在小鼠内耳过表达；随后给予链霉素损伤，初步研究结果表明BDNF过表达对于前庭毛细胞无明显的保护作用，但对于前庭毛细胞的神经突触和前庭神经元有良好的保存作用。此外，我们还构建了携带Atoh1的AAV8病毒载体（AAV8-Atoh1-EGFP），并将其转染损伤后小鼠椭圆囊以诱导前庭毛细胞再生。转染后1月，感觉上皮区域有大量的类毛细胞（Myosin VII阳性，但未见纤毛），并且在移行上皮区域出现异位的类毛细胞，但类毛细胞的超微结构特点及功能还需要更深入的研究。本研究为今后前庭毛细胞再生和神经支配的保存研究奠定基础，也为临床预防和治疗前庭疾患引起的眩晕提供新策略。