小胶质细胞介导缺氧信号通路调控胶质瘤干细胞产生及恶性转归的机制研究

前期实验结果表明缺氧维持恶性胶质瘤细胞干性，但其起源未知，本项目推测由缺氧启动的HIF-1α/Notch信号通路通过调节GAMs的状态，参与GSCs微环境构建，并促使神经干细胞向GSCs恶性转化。拟通过体内外实验，采用RNA干扰、免疫磁珠活细胞分选等技术，观察正常及缺氧条件下GAMs对NSCs增殖、凋亡、自我更新以及体内成瘤能力等的影响，着重探讨GAMs的旁分泌效应和接触效应对NSCs向GSCs转化的作用；同时，研究缺氧诱导的HIF-1α/Notch途径及下游信号通路的靶向调控对前述过程的影响，获得在缺氧条件下GAMs参与GSCs微环境构建、在NSCs向GSCs转化中发挥重要作用的证据，有助于了解GSCs起源及其"干性"的维持机制，初步揭示GSCs微环境的构建模式，为恶性胶质瘤靶向治疗效果提供新的实验依据。

本项目推测由缺氧启动的HIF-1α/Notch信号通路通过调节小胶质细胞的状态，参与胶质瘤干细胞微环境构建，并促使神经干细胞向胶质瘤干细胞恶性转化。拟通过体内外实验，采用RNA干扰、免疫磁珠活细胞分选等技术，观察正常及缺氧条件下小胶质细胞对神经干细胞增殖、凋亡、自我更新以及体内成瘤能力等的影响，着重探讨小胶质细胞的旁分泌效应和接触效应对神经干细胞向胶质瘤干细胞转化的作用；同时，研究缺氧诱导的HIF-1α/Notch途径及下游信号通路的靶向调控对前述过程的影响，获得在缺氧条件下小胶质细胞参与胶质瘤干细胞微环境构建、在神经干细胞向胶质瘤干细胞转化中发挥重要作用的证据，有助于了解胶质瘤干细胞起源及其“干性”的维持机制，初步揭示胶质瘤干细胞微环境的构建模式，为恶性胶质瘤靶向治疗效果提供新的实验依据。. 本课题的研究中，我们成功培养小胶质细胞和神经干细胞；成功构建HIF1α及Notch1过表达载体及目的基因shRNA干扰载体并验证其作用效率。我们发现EIF3D的表达水平在高级别胶质瘤样本中上调明显。抑制EIF3D在胶质瘤中的表达水平后，胶质瘤细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱，该效应通过诱导细胞周期G1/S期阻滞引起。此外，抑制EIF3D在胶质瘤中的表达水平后，胶质瘤细胞的运动能力也随之减弱。我们也发现，胶质瘤细胞表达胎盘生长因子（PIGF），且位于胶质瘤细胞的胞外体中。胶质瘤细胞胞外体能够诱导调节型B细胞的产生，PIGF诱导的调节性B细胞能够抑制胶质瘤特异性CD8+T细胞的活性。此外，我们还揭示胶质瘤组织中TIM4蛋白表达呈阳性， 胶质瘤组织中磷脂酰丝氨酸（PS）表达阳性的T细胞比例升高。缺氧能够上调T细胞中PS的表达。胶质瘤中巨噬细胞吞噬T细胞的能力被削弱，调节性T细胞的比例在胶质瘤中上调明显，这些T细胞能够抑制CD8+T细胞的功能。与此同时，胶质瘤患者CD8+T细胞中TIM3的表达水平也上调明显，其表达水平与胶质瘤病理级别正相关，与患者KPS评分负相关。胶质瘤患者血清中TNF-ɑ的水平也与患者TIM3+CD4+T细胞和TIM3+CD8+T细胞比例负相关。以上研究成果，已总结发表SCI论著6篇，相关研究内容在本研究领域的全国性学术会议上做大会发言2次，培养硕士及博士研究生2名。