BRCA2静默对Kras突变小鼠胰腺癌前病变PanIN细胞的转化作用及机制研究

我们已建立的小鼠基因打靶模型证实，KrasG12D突变启动了胰腺癌前病变-胰腺上皮内瘤变（PanIN），且Tp53、p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为侵润性胰腺癌。在家族性胰腺癌中另一高发频率的抑癌基因BRCA2失活对PanIN转化作用如何以及BRCA2失活是否也可单独促进PanIN发展为胰腺癌仍不清楚？在我们首次成功建立KrasG12D启动的PanIN细胞株和BRCA2失活可使PanIN细胞在软琼脂中形成集落的研究基础上，本项目拟进一步应用miRNA静默PanIN细胞中BRCA2表达，通过肿瘤生物学行为测定、染色体不稳定性分析等，探索PanIN细胞在BRCA2缺失后的恶性转化作用；应用Microarray技术等，鉴定BRCA2缺失后相关新的下游靶基因，并研究其在恶性转化中的作用。因此，本项目研究有助于阐明PanIN细胞恶性转化新途径及机制，为胰腺癌个性化靶向治疗提供新的理论依据。

Kras突变启动了胰腺癌前病变PanIN，Tp53、Smad4或p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为胰腺癌（PDA）。人PDA中另一高频率的BRCA2失活对PanIN转化作用如何以及BRCA2失活是否也可单独促进PanIN发展为PDA仍不清楚？基于此目的，应用RNA干扰技术，我们成功地构建了含shRNA的慢病毒并感染和静默了Kras突变PanIN细胞BRCA2表达；对有和无shRNA稳定转染的PanIN细胞生物学行为的比较结果显示：BRCA2静默，促进了PanIN细胞的贴壁依赖性生长和软琼脂中非贴壁依赖性生长，具恶性特征；BRCA2沉默促进了PanIN细胞的运动、迁移和侵袭能力；对BRCA2静默的PanIN细胞裸鼠体内致瘤性研究显示，BRCA2沉默促进移植瘤增殖和及转移能力；对其遗传学分析表明，两者除有Kras突变外，并无Tp53、p16、Smad4突变或缺失。此外，基因表达谱分析和进一步的real-time PCR and Western Blot分析表明， BRCA2失活促进了PanIN细胞的Cyclinb2, Cyclina2, Twist1, Wisp1 和Cxcr4表达，但降低了p15, p16 and Wisp2表达。 提示，BRCA2失活促进了PanIN的恶性转化，在体外也可单独促进PanIN发展为PDA。