基于MeCP2甲基化调控枯否细胞分泌炎症因子的栀子苷抗肝纤维化机制研究

Geniposide is the main component of Gardenia jasminoides which is a sort of iridoids. It was reported that geniposide had good effects on inflammation and its related diseases. In the treatment of liver fibrosis, geniposide can effectively inhibit the expressions of α-SMA,Collagen I and promote the expressions of PPARgamma. It was demonstrated that geniposide could inhitbit the expressions of MeCP2 in our further research. Meanwhile it was found that geniposide inhibited the secretion of inflammatory cytokines such as TNF-α、IL-1βinduced by LPS in RAW264.7 cell line. The project will intend to invesigate the effects of geniposide in the liver fiborosis disease model induced by composite factors of high-fat emulsion and the regulatory effects of geniposide in the process of the inflammatory cytokines' release in Kuffer Cell in liver fibrosis. It also plan to consider the relationship between the methylation of PPARgamma and the expressions of MeCP2、the active of NF-κB and the posphorylations of IKKα、IKK. This study was conducted with the objective of evaluating the molecular mechanisms of geniposide efficiency in the secretion of inflammatory cytoines in kuffer cell and related signal pathways. This project can not only provide a potential cell targets for geniposide but also a valuable experimental exploration for the anti-fibrosis mechanisms of geniposide.

栀子苷作为一种环烯醚萜苷,是中药栀子的主要药效成分。申请人前期研究发现，栀子苷对炎症及相关性疾病具有良好的疗效，在针对肝纤维化的治疗中发现栀子苷可有效抑制α-SMA、Collagen I表达，促进PPARγ的表达，进一步研究发现栀子苷可明显抑制甲基CpG结合蛋白MeCP2的表达；并且栀子苷预处理RAW24.7细胞可明显抑制LPS刺激引起的TNF-α、IL-1β等细胞因子的释放。本项目拟在高脂乳剂复合因素诱导的肝纤维化模型中继续确认栀子苷的疗效；以Kupffer细胞为靶细胞，研究栀子苷对Kupffer细胞分泌炎症因子的影响，并且通过研究PPARgamma的甲基化状态与MeCP2表达、NF-κB活性及IKKα、IKKβ磷酸化表达的相互关系，揭示栀子苷影响肝纤维化大鼠Kupffer细胞分泌细胞因子的机理及其相关信号通路。本项目旨在寻找栀子苷可能的细胞内作用靶点，探讨栀子苷抗肝纤维化的作用机制。

炎症因子持续刺激肝脏炎症性疾病发生的关键。枯否细胞(Kupffer)细胞作为肝脏内巨噬细胞是炎症因子的产生的主要来源。前期研究发现，DNA甲基化修饰促进了巨噬细胞炎症因子的分泌。近期研究发现，甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)在肝纤维化组织中高表达，利用siRNA沉默MeCP2可抑制HSC活化增殖，进一步研究发现，MeCP2可抑制Hedgehog信号通路中PTCH1表达而激活HSC。我们在研究MeCP2在急性肝损伤中的作用，还发现CCl4诱导的急性肝损伤模型中，MeCP2蛋白表达明显升高，沉默MeCP2可明显降低IL-6，TNF-α等炎症因子的释放，过表达MeCP2则IL-6，TNF-α表达增加，提示其对炎症因子的释放具有重要作用。提示MeCP2可能在肝脏炎症性疾病发生发展中具有重要作用。.栀子苷作为一种环烯醚萜苷，是中药栀子的主要药效成分，具有利胆、消炎等药理作用。前期研究证实栀子苷对非酒精性脂肪性大鼠具有防治作用，但其作用机制还不明确。鉴于栀子苷在消炎中的作用，我们重点探讨了其对巨噬细胞炎症因子释放的机制探讨。研究发现，栀子苷对CCl4诱导的急性肝损伤具有保护作用，可降低ALT，AST水平，抑制原代提取的Kupffer细胞炎症因子的分泌。进一步研究发现栀子苷可抑制急性肝损伤中升高的MeCP2表达，降低Hedgehog信号通路中Shh，GLIS1的蛋白表达，增加Hedgehog信号通路抑制蛋白PTCH1的表达。提示栀子苷可能通过抑制MeCP2引起的PTCH1甲基化，抑制炎症因子的释放，产生肝脏保护作用。.通过机制探讨明确中药活性成分的作用靶标，是促进中药现代化研究的重要策略。本项目通过明确MeCP2在炎症因子释放中的作用，探讨栀子苷抗炎的作用靶点，为中药的研究提供了新的思路。.鉴于表观遗传修饰在肝脏炎症性疾病中的作用，在国家基金的支持下，我们还探讨了非编码RNA在肝纤维化中的作用。发现miR-200a可通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进肝星状细胞(HSC)活化，miR-203则通过调控TRPV4信号蛋白产生促进HSC活化的作用。