绵羊精原干细胞的分离富集与体外长期培养研究

精原干细胞具有自我复制和分化成精子的能力，是动物体内唯一能进行遗传信息传递的成体干细胞。因此，精原干细胞既是干细胞生物学的重要研究对象，又是研究精子发生、制作转基因动物和研究基因功能的重要资源。目前小鼠、大鼠、人的精原干细胞体外长期培养体系都已经成功建立，但家畜精原干细胞研究相对缓慢，2008年Aponta等报道体外成功培养牛精原干细胞长达一个月，但绵羊精原干细胞的长期培养研究还没相关报道，主要原因是目前还没找到合适的绵羊精原干细胞表面特异性分子标记物和培养体系。本研究拟采用PLZF、PGP9.5、VASA等分子标记物，作免疫组化和荧光免疫染色来检测不同年龄绵羊睾丸组织中精原干细胞的含量，然后两步酶消化法和差异贴壁等方法纯化精原干细胞并建立和优化绵羊精原干细胞体外长期培养体系。该项研究对利用精原干细胞技术来提高转基因动物的效率和培育家畜优良新品种中开创新的途径。

精原干细胞具有自我复制和分化成精子的能力，是动物体内唯一能进行遗传信息传递的成体干细胞。因此，精原干细胞既是干细胞生物学的重要研究对象，又是研究精子发生、制作转基因动物和研究基因功能的重要资源。目前小鼠、大鼠、人的精原干细胞体外长期培养体系都已经成功建立，但家畜精原干细胞研究相对缓慢。本研究以绵羊为研究对象，比较了不同月龄羔羊睾丸曲细精管中的精原干细胞的动态变化，在此基础上选择适龄绵羊，通过两步酶消化分离并差异贴壁法富集精原干细胞，对精原干细胞的短期和长期培养进行了研究。我们采用 PLZF 、PGP9.5 、VASA 等分子标记物，作免疫组化和荧光免疫染色来检测不同年龄绵羊睾丸组织中精原干细胞的含量，结果显示4个月龄以下的羔羊睾丸曲细精管中精原干细胞含量较多，便于分离提纯。然后两步酶消化法和差异贴壁等方法纯化精原干细胞，结果表明2个月龄以前的睾丸组织中得到的性原细胞经分离、纯化后可以用于体外培养研究。最后我们建立和优化绵羊精原干细胞体外长期培养体系。该项研究对利用精原干细胞技术来提高转基因动物的效率和培育家畜优良新品种中提供一定的理论基础.