纤维粘连蛋白EDA片段对腺样囊性癌侵袭能力的影响

腺样囊性癌（ACC）是涎腺常见的上皮性恶性肿瘤，具有极强的侵袭性，治疗棘手并严重威胁患者生命。恶性肿瘤的侵袭与细胞外基质关系密切，纤维粘连蛋白是细胞外基质的重要成分，其可变剪接片段EDA的表达与多种肿瘤的侵袭性成正相关，并被证明有促进肿瘤细胞运动、增殖的作用。但EDA片段对涎腺ACC侵袭性的影响尚不清楚，而且迄今为止关于EDA的功能研究尚未见其在细胞内功能的表达研究，亦未建立动物模型长期观测，因此无法证明其在肿瘤侵袭中发挥的真正作用。本研究拟在已成功构建的分泌性和非分泌性真核表达载体基础上，用分子生物学方法研究EDA片段在ACC细胞内的功能，并建立动物模型较长期观察EDA与ACC侵袭性之间的关系；敲除EDA外显子，最终确定EDA在完整纤维粘连蛋白中对涎腺ACC侵袭能力的影响及其信号途径，寻找阻遏涎腺ACC的靶分子，为探讨临床有效的治疗方法提供实验依据。

已有研究证实，纤维连接蛋白剪切片段EDA（FN+EDA）与多种肿瘤的增殖、侵袭等生物学行为密切相关，本课题组前期研究也已证实FN+EDA在侵袭性极强的涎腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma of salivary glands，SACC）中具有明显高表达。但是迄今为止，尚未直接观察到EDA对SACC的影响和机制。本研究在前期已经成功建立EDA片段真核表达载体，为从细胞内探讨EDA在ACC细胞侵袭、转移和增殖等生物学行为方面的作用程度和变化，明确其影响ACC生物学行为的细胞内信号转导机制，本课题组计划：采用真核表达载体pcDNA3.1（+）- EDA瞬时转染SACC细胞后，体外观察其运动、粘附和增殖变化；通过敲除EDA外显子，体外观察EDA-SACC细胞的运动、粘附、增殖等情况;以上述实验为基础，比较Ras-MAPK/ERK细胞传导途径的P130cas、ERK2及CyclinD1等分子表达的变化情况。.本项目中，以本课题组此前构建的纤维粘连蛋白（Fibronectin, FN）可变剪接片段EDA真核表达质粒为基础，涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83分别转染真核表达载体PIRES2-Igk-EDA-EGFP和空载体PIRES2-EGFP，后者作为空白对照，从多个角度检测了FN-EDA对SACC生物学行为的影响。研究结果明确：高表达EDA的SACC的克隆形成实验、倍增时间和细胞增殖周期都未呈现高增殖活性；其细胞迁移与侵袭实验可见具有明显差异；同质性粘附和EMT标志物的E-cadherin水平明显下调，F-actin染色可见其细胞骨架的形态改变明显。这都证明EDA高表达的SACC提供形成EMT，使细胞的运动能力明显增强。这些结果首次为我们从细胞内作用途径了解SACC具有更强侵袭行为的生物学分子机制研究提供了可能，也为今后SACC的进一步生物靶向治疗研究奠定了基础。.自2011年起，本课题组按照上述研究计划，已经顺利完成了课题计划中体外实验的全部主要内容，上述已经完成的研究结果目前已经撰写了英文论文，论文正在投稿中（已投稿Plos ONE），一篇中文论文已投稿给北京口腔医学杂志，并被录用；培养研究生2人，1人已经毕业。部分关于信号通路和体内验证研究的内容仍在继续进行，有些数据尚在分析整理中。