分化相关转录因子Hey1在成牙本质细胞样细胞发生中的作用及其分子机制

成牙本质细胞样细胞(ODL细胞)的发生是牙髓严重损伤修复的基础，TGF-β、BMP和Notch途径对它的发生具有重要的调控作用。我们以往研究表明，分化相关转录因子Hey1可抑制ODL细胞发生，但具体作用及机制尚不清楚。文献提示Hey1可能是TGF-β、BMP和Notch通路参与调控细胞分化作用的共同关键"节点"分子。本项目拟以具有高度ODL细胞分化活性的MDPC-23细胞系为对象，用基因转染和RNAi技术建立Hey1稳定过表达和基因沉默细胞模型，通过检测TGF-β、BMP诱导下ODL细胞发生标志的表达变化、细胞形成牙本质样组织能力的变化，分析Hey1抑制ODL细胞发生的生物学作用；进一步用报告基因和染色体免疫共沉淀技术，分析Hey1在ODL细胞发生调控网络中的定位，进而揭示其分子作用机制。本项目的实施，将大大促进对ODL细胞发生机理的认识，为研发新型促牙齿再生药物和活髓保存材料提供新思路。

牙齿发生疾病时，保存活的牙髓具有重要意义，成牙本质细胞样细胞(ODL细胞)的发生是牙髓严重损伤修复的基础，弄清其分化的调控机制将对临床治疗技术的改进产生重大影响。Hey1是一种与分化相关的转录因子，文献提示它可能参与了ODL细胞分化的调控，但机制尚不清楚。本项目利用具有高度ODL细胞分化活性的OLC细胞系，借助基因转染和RNAi技术建立了Hey1稳定过表达和基因沉默的细胞模型；对其进行矿化诱导，用定量PCR、免疫荧光染色等技术检测了牙本质涎磷蛋白（DSPP）、碱性磷酸酶（ALP）等ODL细胞标志物表达水平的变化，以及细胞形成矿化结节能力的变化，发现Hey1能促进DSPP和ALP的表达从而调控细胞向ODL细胞方向分化；进一步用定量PCR、Western blot等检测了BMP2诱导下DSPP和Runx2表达水平的变化，结果提示Hey1可能通过对Runx2表达的负向调控实现其调控细胞向ODL细胞方向分化得功能。本研究加深了我们对ODL细胞发生机理的认识，为研发新型促牙齿再生药物和活髓保存材料提供了新的选择。