Swiprosin-1在移植肝缺血再灌注肝窦内皮细胞损伤与凋亡中的机制研究

有效保护肝窦内皮细胞（SEC）是防治肝移植缺血再灌损伤（IRI）的关键。Swiprosin-1是一个新发现的钙信号通道相关蛋白，在淋巴细胞、肥大细胞及内皮细胞等多种细胞中有表达，具有促进细胞凋亡及细胞因子表达等功能。在前期工作中我们发现Swiprosin-1在肝移植IRI的SEC中有较高表达，以此推测Swiprosin-1与肝移植IRI时SEC的活化和损伤有关，本研究拟在离体培养的肝SEC及大鼠肝移植IRI模型中阐明Swiprosin-1 是否参与了缺氧再充氧下SEC损伤中Ca2+超载和凋亡的进程，以及与肝移植IRI的相互关系；并采用靶向Swiprosin-1的RNAi重组腺病毒载体抑制Swiprosin-1的表达，观察其对肝移植IRI的保护作用。本项目有助于明确缺氧再充氧下肝窦内皮细胞活化和损伤的机制，增进对肝移植IRI本质的认识，为防治肝移植IRI提供新途径。

有效保护肝窦内皮细胞（SEC）是防治肝移植缺血再灌损伤（IRI）的关键。Swiprosin-1 是一个新发现的钙信号通道相关蛋白。研究发现Swiprosin-1的表达在缺氧条件下SEC和大鼠肝移植的IRI中均是提高的，免疫组化显示阳性表达沿肝窦分布。对缺氧培养的SEC进行Swiprosin-1表达的RNAi干扰，显示：RNAi组，IL-8、NO分泌有明显降低（P﹤0.05）。并且，Swiprosin-1的表达 与ICAM-1和 IL-8分泌呈正相关。RNAi组明显降低 SEC的凋亡及Caspase-9的表达，表明Swiprosin-1与SEC 的凋亡有密切相关性。结果显示Swiprosin-1与SEC细胞内钙离子浓度变化及对钙离子浓度反应灵敏的酶PLA2的表达均无明显的相关性，因此Swiprosin-1在Ca2+信号传导通路的作用还需要进一步探索。在大鼠肝移植的IRI模型中，同时对Swiprosin-1进行过表达和RNA干扰。连续监测大鼠肝移植后血清学各项指标。结果显示各项指标在IRI损伤组较对照组均有显著增加（P﹤0.05，P﹤0.01）；其中，NO、PAF在术后较早阶段就出现升高，可能是对早期缺氧的反应，而HA、ICAM-1、IL-8的升高则相对滞后，提示是再灌注损伤的重要反应因子。虽然在各IRI损伤组中， RNAi组各项指标较其它两组升高幅度小，而过表达组各项指标较其它两组升高幅度大，但是与单纯IRI组比较无明显差异。因此本实验提示减少\增加大鼠移植肝组织Swiprosin-1的表达对肝组织IRI损伤时的重要反应因子的表达改变不明显。当前关于Swiprosin-1的研究较少，就目前文献检索结果显示关于Swiprosin-1与肝移植IRI的研究尚属首次。本实验强烈提示Swiprosin-1与SEC缺氧损伤的相关性，主要表现为促炎性分子的分泌及凋亡作用。在大鼠肝移植的IRI模型中，未能证实Swiprosin-1与肝组织的缺血再灌注损伤的相关性。可能原因是由于整体内影响肝组织缺血再灌注损伤的因素错综复杂，单一因素所起的作用有限，因此对肝移植后的IRI的研究应更加着重于多因素的综合性研究。综合分析，我们认为Swiprosin-1具有在IRI防治方面进一步研究的价值。