免疫负调控分子TIPE2对于肝细胞肝癌迁移、侵袭的作用及其机制的研究

TIPE2是在小鼠实验中新发现的负性免疫调节蛋白，主要表达于免疫系统和免疫细胞，在维持小鼠免疫稳态中发挥重要作用。该分子在人体内的功能不清楚。我们发现TIPE2在人体内的表达规律与小鼠不同，提示其在人体的功能不完全等同于鼠。继而我们发现TIPE2在人肝癌细胞中低表达，而体外过表达TIPE2蛋白的癌细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。本课题的主要目的是阐明新分子TIPE2对于肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响，并探讨其作用机理，为探索新的治疗手段提供依据。课题将通过对临床标本的检测来验证TIPE2与肝细胞肝癌的相关性；通过改变TIPE2的表达水平来验证其对于肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响，并在荷瘤动物模型中观察癌细胞转移情况的差异；筛选与TIPE2相互作用的分子，并通过实验来分析TIPE2与这些分子的相互影响，探讨TIPE2的作用机制；进一步研究将结合生物信息学查明TIPE2与其他分子相互作用的功能域。

本课题研究的主要目的是阐明新分子TIPE2对于肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响，并探讨其作用机理，为探索新的治疗手段提供依据。TIPE2是在小鼠实验中新发现的负性免疫调节蛋白，主要表达于免疫系统和免疫细胞，其在人体内的功能不清楚。我们发现TIPE2在人体内的表达规律与小鼠不同，继而发现相比于癌旁组织，TIPE2在肝癌组织中表达下调或缺失。为了阐明TIPE2在肝癌发生发展中的作用，我们详细分析了TIPE2表达与肝癌临床病理特征之间的关系，结果提示我们TIPE2表达降低或缺失与肝癌的侵袭转移有关。随后我们通过实验证实，TIPE2能够抑制肝癌细胞的生长和克隆形成，能够促进饥饿诱导的细胞死亡，并且能够抑制肝癌细胞的促进血管形成能力，体外过表达TIPE2蛋白的癌细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。在荷瘤动物体内进行的实验同样证实了上述结论，对于裸鼠皮下瘤和肝脏原位肿瘤的生长和转移，TIPE2都有明显的抑制作用。随后我们展开了对于IPE2作用机制的研究，假设人TIPE2通过Rac1通路影响肝癌的转移和血管形成。实验证实了Rac1的表达和活性与肝癌细胞的转移能力呈正相关，而TIPE2能与Rac1结合并抑制其活性，进而证明TIPE2通过Rac1通路抑制肝癌细胞的迁移和侵袭；还证明了TIPE2发挥抑制肝癌细胞促血管形成能力依赖于与Rac1的结合。在进一步的机制研究中又发现TIPE2可以通过Rac1通路抑制微丝聚合、抑制MMP9和uPA的表达、抑制VEGF的表达。至此我们阐明了人TIPE2对于肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响，并初步明确了其作用机理，完成了最初设定的课题目标。.我们在实验中发现TIPE2能够促进细胞死亡，但是这种死亡的具体形式尚不清楚。进而我们对此展开了研究。我们证明TIPE2促进细胞的死亡的方式是自噬，其机制也主要是通过Rac1通路。.本课题的顺利完成，揭示了TIPE2这一新分子在人体中的未明功能，并阐明了TIPE2的作用机理，完善了对于免疫调控网络和细胞信号转导网络的认识。其次，研究结果推进了对于肝癌细胞迁移、侵袭的分子生物学机制的认识；为临床预防肝癌侵袭、转移提供了新的参考，为探索肝癌的新型生物治疗手段提供理论与技术基础。本研究也有助于启示对其他恶性肿瘤的研究，完善对于细胞基因组和信号转导网络的认识。