高脂高能量对子代LXRα介导的胆固醇平衡的作用及其干预研究

母代高胆固醇血症是子代胆固醇代谢紊乱的重要因素。我们前期实验表明：子代血清低密度脂蛋白胆固醇水平（LDL）与母代LDL呈显著正相关；膳食植物固醇是有效降低LDL水平的活性因子。本研究拟利用体外肝细胞培养和饮食诱导的高胆固醇血症孕鼠模型，采用气质联用色谱检测血清、组织、粪便及胆囊胆固醇和植物固醇及其代谢物含量，实时定量PCR、分子杂交等方法测定胆固醇合成和分解关键蛋白HMGCoAR和CYP7A1、核受体LXRα及其目标基因/蛋白的表达水平，观察母代对子代胆固醇平衡的影响及植物固醇的干预作用。采用免疫沉淀、免疫印迹、阻抑（siRNA）和激活（T0901317）技术，分析LXRα与目标基因、辅助抑制蛋白和辅助激活蛋白的结合活性、LXRα磷酸化/乙酰化修饰状态，揭示母代影响子代胆固醇代谢的机制及植物固醇的作用靶点，为早期预防心血管疾病提供科学依据。

世界卫生组织宣称，56%的心脏病和18%的脑卒中可归结为血总胆固醇水平升高，因此，控制血胆固醇水平，对于预防心血管疾病具有重要的现实意义。导致TC升高的主要危险因素包括高脂肪和高胆固醇膳食、身体活动少、饮酒过量、肥胖和超重、糖尿病和高血压等。最近研究显示孕期母体高胆固醇血症可加速子代的动脉粥样硬化进程，增加子代患心血管系统疾病的危险性。动物研究证明，母代在孕期/哺乳期进食高脂高能量膳食，可导致子代胆固醇代谢紊乱、肥胖以及血管功能受损等。.本研究以10周龄孕鼠（C57BL/6j）为对象，分别饲以基础饲料和高脂高能量饲料，分别在新生、断乳和成年（3月龄）收集生物学样本，同时在新生或断乳时处死母鼠，采集生物学样本。通过检测血氧化应激、总胆固醇、高/低密度脂蛋白胆固醇水平、胰岛素水平等分析孕期高脂高能量膳食对子代血胆固醇水平的影响，发现子代血清低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）水平与母代LDLC水平呈显著正相关，说明子代胆固醇代谢受到孕期母代血脂水平的影响；通过检测刚脏胆固醇合成和分解关键基因的表达，以及基因芯片技术筛选受孕期膳食影响的基因、生物信息学分析受影响的信号通路和功能，并最终寻找孕期高脂膳食影响子代健康的关键基因和靶点，通过分析氧化应激状态，发现孕期母体进食高脂高能量膳食，引起母体肝脏的氧化应激，同时子代肝脏氧化应激增强，分析发现二者存在相关性；甲基化分析发现胆固醇代谢关键分子均存在启动子区域甲基化程度的差异，其中关键的包括LXRα、LDLR、PPARγ等。通过本项目的研究，我们得出初步结论，孕期高脂高能量膳食子代成年后血清胆固醇水平显著高于对照组，胆固醇代谢紊乱的关键分子是LXRα的下游分子——SREBP1，靶点可能是线粒体，氧化应激信号的传递在其中可能其重要作用，同时可能存在基因修饰问题。.在上述研究的基础上，我们采取植物固醇干预，研究早期预防对子代的影响，结果发现，植物固醇可显著改善母代的胆固醇水平和氧化应激，但对子代胆固醇代谢的影响较小。