口腔鳞癌VEGF诱导DC向内皮细胞转分化及其机制研究

口腔鳞癌生物治疗效果并不理想，肿瘤的免疫逃逸机制在其中发挥了重要作用。而肿瘤分泌的VEGF抑制了DC激活T淋巴细胞的抗瘤效应是其重要原因之一。文献报道，参与机体新生血管形成的EC与DC具有共同的前体细胞。本课题组将体外诱导的DC与高表达VEGF的舌鳞癌细胞株共培养，发现DC可逆向表达分化分子表型，提示DC在VEGF作用下可能向内皮细胞转分化。本研究拟以舌鳞癌细胞系与DC体外共培养，观察肿瘤VEGF诱导DC向EC转分化并参与肿瘤血管形成的作用；利用基因芯片技术检测该转分化的基因表达的变化，分析其差异表达基因，构建相关信号传导途径；筛选信号传导关键分子，并以相应阻断剂或RNAi技术，检验该关键分子在VEGF诱导DC向内皮细胞转分化及其在肿瘤血管形成过程中的作用，以期阐明DC向内皮细胞转分化的分子机制。本研究将为肿瘤的免疫逃逸机制提出新的理论和认识，有助于发展口腔鳞癌生物治疗的新手段和新方法。

本研究利用流式细胞术对发现OSCC患者外周血中髓样DC（mDC)比例显著降低(P<0.0001)，具有成血管功能的CD14+Tie2+细胞及髓样起源抑制细胞MDSC、抑制性T细胞（Ts）、调节性T细胞（Treg）细胞比例显著升高(P<0.0001)；而辅助性T细胞（Th）比例降低 (P<0.005)。体外实验明确OSCC内VEGF参与了DC的异常分化为具有内皮样细胞特征的细胞群及MDSC细胞群。其次，在 OSCC肿瘤组织局部探讨了VEGF表达及CD14+前体DC的浸润，发现OSCC内VEGF高表达，CD14+前体DC的浸润程度高；VEGF的表达与MCP的表达呈正相关（P=0.00005）； OSCC癌灶组织癌巢内VEGF表达与肿瘤的TNM分期呈正相关(P=0.017)；间质内而非癌灶内CD14+ 前体DC浸润与肿瘤分化呈正相关(P=0.0478)。提示口腔鳞癌中VEGF能够趋化前体DC至肿瘤区，并参与了肿瘤进程。进一步，为了探明癌灶组织内高浓度的VEGF是否趋化外周血内前体DC至肿瘤区，我们进行Transwell实验，发现OSCC微环境内高浓度的VEGF可趋化前体DC至肿瘤微环境内；添加VEGF后DC表面的标记显著性降低。此部分证实：VEGF促进了前体DC迁移至口腔鳞癌微环境内。并对进行了活体成像进行了研究。最后，探明OSCC内VEGF通过JAK/STAT3通路改变了DC的正常分化途径。首次发现OSCC癌巢组织内p-STAT3表达与肿瘤分化相关(P=0.05)；间质内p-STAT3表达与炎性免疫细胞浸润相关(P=0.025)；体外实验发现高浓度OSCC培养体系中p-STAT3表达较对照组显著升高，而在拮抗VEGF表达后p-STAT3表达低。.综上所述，本研究 ①发现高表达VEGF的OSCC肿瘤中前体DC异常分化； ②首次发现癌灶中VEGF、CD14及p-STAT3表达与肿瘤进程有关且STAT3活化与肿瘤浸润的免疫细胞的关系；③在口腔鳞癌中发现OSCC肿瘤细胞分泌的VEGF也可趋化前体DC至癌灶并确认可通过JAK/STAT3通路异常活化调控DC异常分化。