一个功能未知的lncRNA uc.294在早发型子痫前期中的作用与机制研究

LncRNA uc.294 is identified from differential lncRNAs profile in placentas of patient with early onset preeclampsia using a third-generation lncRNA microarray. Our studies revealed that silence of uc.294 in human trophoblastic cell line HTR-8/SVneo could increase invasion of trophoblastic cells, further bioinformatics analysis and experiments prompted that FIH1 is the potential target gene. In this study, we will investigate the different expression levels of uc.294 and FIH1 to evaluate the relationship between uc.294 and early onset preeclampsia. We will further investigate possible mechanism of uc.294 in trophoblastic cell abnormal invasion by overexpressing and knock down strategy. This study helps to reveal the mechanism of lncRNA uc.294 action in early onset preeclampsia, and may provide new clues and intervention targets for prevention of early onset preeclampsia.

lncRNA uc.294是我们采用第三代芯片技术获得的、显著高表达于早发型子痫前期患者胎盘组织中、一条功能未知的lncRNA。前期发现，uc.294沉默可显著增加滋养细胞侵袭力；生物信息学分析及实验均证实FIH1为其靶基因；且已有文献报道FIH1表达下调，可引发HIF-1α、TGF-β3升高，致滋养细胞侵袭力下降，提示uc.294可能通过调控FIH1表达、影响滋养细胞侵袭力而参与早发型子痫前期的发病。本课题拟：检测早发型子痫前期和对照组胎盘组织中uc.294、FIH1表达，评估uc.294与早发型子痫前期的关系；采用过表达、表达沉默策略，阐明uc.294对滋养细胞侵袭力的影响；通过挽救实验，论证uc.294调控FIH1、影响滋养细胞侵袭力致早发型子痫前期发病的机制。uc.294人鼠高度同源，本研究可为早发型子痫前期的临床防治提供新的靶标。

1、背景：子痫前期常可导致严重胎儿生长受限、母亲重要脏器损害、早产等结局，甚至母婴死亡，但子痫前期病因尚不明确。lncRNA可通过转录、转录后、表观遗传等多个水平，调控发育及各种疾病。Uc.294是通过芯片技术筛选获得的高表达于子痫前期胎盘组织的未知的lncRNA。前期研究中，我们初步推测FIH1 可能是uc.294 作用的靶点。本研究旨在探讨uc.294在早发型子痫前期中的作用及其可能机制。.2、 主要研究内容：①检测不同子痫前期患者胎盘组织中lncRNA uc.294 及FIH1 表达水平，从临床水平系统评估lncRNA uc.294 与早发型子痫前期之间的关系；②采用过表达，探讨lncRNA uc.294 在滋养细胞侵袭力异常中的作用；③以FIH1 为机制切入点，通过挽救实验策略，论证lncRNA uc.294 参与滋养细胞侵袭力异常的分子机制。.3、研究结果及意义：1）关于IncRNA uc.294与子痫前期的临床相关性研究发现：① uc.294在子痫前期胎盘组织中的表达较对照组升高，其下游相关基因FIH1的表达较对照组降低。2）关于IncRNA uc.294的生物学行为研究发现：① uc.294在HTR-8/SVneo滋养细胞中高表达；②在HTR-8/SVneo滋养细胞中过表达uc.294后，细胞增殖（Ki67、PCNA）、细胞侵袭（MMP2、MMP9）相关基因均显著下调，细胞凋亡（Caspase3、Bcl-2）相关基因均显著上调；提示uc.294可以促进HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡，抑制HTR-8/SVneo滋养细胞的增殖和侵袭能力。3）关于lncRNA uc.294调控FIH1的分子机制研究发现：①过表达uc.294时，定量PCR与Western结果显示FIH1表达水平显著降低；② FIH1过表达时，研究发现HTR-8/SVneo滋养细胞的凋亡能力降低，细胞侵袭力降低，凋亡能力降低。4）lncRNA uc.294 是我们发现的早发型子痫前期相关的差异lncRNA，迄今，国内外均未见lncRNA uc.294 参与滋养细胞侵袭力异常的研究报道。