RhoA/ROCK促巨噬细胞活化在糖尿病动脉粥样硬化中的作用及其机制研究

糖尿病易并发动脉粥样硬化，而巨噬细胞的激活在糖尿病动脉粥样硬化病理机制中发挥重要作用。抑制其激活是防治糖尿病动脉粥样硬化的有效途径。已有研究提示RhoA/ROCK信号蛋白参与动脉粥样硬化，但具体机制不明。我们前期研究发现糖尿病大鼠腹腔巨噬细胞RhoA表达显著增高，体外实验发现抑制ROCK可以减少高糖刺激下巨噬细胞的脂质吞噬。据此，本课题将通过药物干预和显性失活突变型质粒转染，抑制RhoA/ROCK通路，研究高糖作用下RhoA/ROCK对单核/巨噬细胞炎性因子分泌、脂质吞噬、趋化迁移等活化过程的作用。同时通过阻断相关信号通路，明确单核/巨噬细胞内与RhoA/ROCK相互作用的其它信号分子。另外，体内研究确证抑制糖尿病apeE-/-小鼠RhoA/ROCK通路将抑制巨噬细胞在血管壁的聚集，减少斑块面积、数量，延缓糖尿病动脉粥样硬化的形成，证明RhoA/ROCK通路是防治糖尿病动脉粥样硬化的靶点。

巨噬细胞的活化在糖尿病动脉粥样硬化的病理机制中发挥重要作用。本课题旨在明确RhoA/ROCK信号通路在高糖促进巨噬细胞活化中的作用。本课题通过体外细胞学研究发现了以下结果：1）通过药物法舒地尔抑制RhoA/ROCK通路后，能显著降低巨噬细胞吞噬低密度脂蛋白；晚期糖基化终末产物干预巨噬细胞后呈时间及剂量依赖性促进Nampt蛋白的表达。法舒地尔干预单核细胞能显著降低其基质金属蛋白酶-9的表达；10-5 mM 法舒地尔干预高糖（葡萄糖浓度：20mM）作用下的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）不同时间，发现法舒地尔能显著降低相应时间点p-MYPT/MYPT蛋白表达的比值。高糖能增加粘附分子VCAM-1 和 趋化因子MCP-1 mRNA和蛋白的表达，而抑制RhoA/rock通路后可抑制VCAM-1 和 MCP-1 mRNA和蛋白表达；高糖能促进单核细胞与HUVECs细胞的粘附，而抑制RhoA/ROCK通路能显著降低其粘附作用。通过体内研究发现：向apoE-/-小鼠腹腔55mg/kg/天连续5天小剂量注射链脲霉素，继之以高脂饲料喂养建立了糖尿病动脉粥样硬化小鼠，以药物干预抑制模型小鼠的RhoA/ROCK通路后，通过主动脉体外油红染色斑块，发现斑块数量和面积较对照组显著减少。本课题通过体外及体内研究证实RhoA/ROCK信号通路参与糖尿病动脉粥样硬化的发生。抑制RhoA/ROCK活性可以减缓糖尿病动脉粥样硬化的严重程度。