分子伴侣Grp94通过调控UPR通路参与胰腺癌发生发展机制探讨

葡萄糖调节蛋白（Grps）是一组内质网分子伴侣，也是UPR通路效应分子，参与蛋白质折叠、组装，防止内质网错误折叠蛋白积聚。Grp94，Grps家族成员之一，在许多肿瘤中高表达，参与肿瘤的发生发展。而Grp94与胰腺癌相关性的研究尚未见报道。本课题组先前研究胰腺癌标本发现，胰腺癌高表达Grp94，且肿瘤分化越差，Grp94表达水平越高，提示胰腺癌发生、发展及转移可能与Grp94高表达有关,详细机制有待进一步探讨。Grp94下调表达后UPR通路下游其它伴侣分子的表达水平也发生变化，提示Grp94与肿瘤的相关性可能与UPR通路活化状态有关。本课题拟从细胞水平检测Grp94下调表达后胰腺癌细胞生物学特性的改变、UPR通路的活化状态和下游分子的表达情况；并利用仓鼠胰腺癌原位模型，进一步观察Grp94下调表达后在体肿瘤的生长特性和UPR通路的活化状态，寻找Grp94参与肿瘤发生发展的可能机制。

葡萄糖调节蛋白（Grps）是一组内质网分子伴侣，也是UPR通路效应分子，参与蛋白质折叠、组装，防止内质网错误折叠蛋白积聚。Grp94，Grps家族成员之一，在许多肿瘤中高表达，参与肿瘤的发生发展。而Grp94与胰腺癌相关性的研究尚未见报道。本课题组先前研究胰腺癌标本发现，胰腺癌高表达Grp94，且肿瘤分化越差，Grp94表达水平越高，提示胰腺癌发生、发展及转移可能与Grp94高表达有关,详细机制有待进一步探讨。Grp94下调表达后UPR通路下游其它伴侣分子的表达水平也发生变化，提示Grp94与肿瘤的相关性可能与UPR通路活化状态有关。本课题拟从细胞水平检测Grp94下调表达后胰腺癌细胞生物学特性的改变、UPR通路的活化状态和下游分子的表达情况；并利用裸鼠皮下肿瘤负荷试验，进一步观察Grp94下调表达后在体肿瘤的生长特性和UPR通路的活化状态，寻找Grp94参与肿瘤发生发展的可能机制。. 在前期研究中，我们发现，grp94在人胰腺癌组织表达显著升高，未明确其在胰腺癌发病过程中意义。利用免疫组织化学筛选多种人胰腺癌细胞系，筛选高表达grp94的细胞为实验细胞，结果sw1990细胞着色最明显。设计并合成携带GRP94的siRNA序列的病毒载体，用构建好的病毒感染人胰腺癌细胞sw1990，通过realtimePCR 和western blot等方法检测凋亡相关基因bcl-2，bcl-xl，caspase3，caspase9，caspase12等证实下调的grp94影响sw1990细胞的凋亡的影响，并检测UPR通路相关分子，明确其对该通路活性的影响，并通过MTT、EDU等试验明确其对该细胞增殖速度的影响，另外，通过划痕实验和transwell小室明确下调的grp94与肿瘤迁移的关系，另一方面，通过transwell侵袭实验明确下调grp94对肿瘤侵袭性的影响。并筛选稳定低表达grp94的sw1990细胞系，与对照病毒载体稳定转染细胞一起进行裸鼠皮下肿瘤负荷试验，观察其对肿瘤生长的影响。结果证实，下调的grp94影响胰腺癌细胞sw1990的增殖、侵袭、迁移，并能抑制肿瘤的生长。. 我们的研究结果提示：grp94可能与胰腺癌的发生有关，并可作为肿瘤治疗的靶点发挥作用。