遗传性角膜病小鼠突变基因精确定位与克隆

本研究以ENU诱变获得的单基因显性遗传角膜病突变小鼠为对象，在利用微卫星标记将突变基因初步定位于第13条染色体距着丝粒45.24cM附近(D13Mit262 LOD值40.54,D13Mit76 LOD值38.77)的基础上，通过不同年龄阶段突变小鼠的临床综合检查、病变组织的病理学验证以及分子生物学手段，确定角膜病类型，揭示病变的动态发展过程和发病机制；同时继续选用突变位点附近的高密度微卫星、STS标记将突变基因精确定位到1cM范围；从基因组局部数据库中筛选候选基因或候选EST（用电子步移辅助以传统基因步移法获得全长EST），以此为基础设计引物对角膜病小鼠mRNA进行RT-PCR后T载体克隆相关基因、测序鉴定突变碱基，注册新基因。本研究将建立新的小鼠模型品系，为角膜病分子机理研究及人类相关基因的克隆奠定基础，为临床早期诊断、预防、治疗人类遗传性角膜病患者的新方法、新技术研究提供理论依据。