异丙酚预处理对缺氧Ⅱ型肺泡上皮细胞自噬的影响及机制研究

缺血缺氧性肺损伤是围手术期常见的病理损伤，Ⅱ型肺泡上皮（ATⅡ）细胞在损伤后的组织修复中发挥重要作用。我们的前期研究显示：静脉麻醉药异丙酚预处理能拮抗缺氧导致的大鼠ATⅡ细胞凋亡、促进细胞生存，其机制与异丙酚对"缺氧- HIF-1（缺氧诱导因子-1）- Bnip3"通路的抑制有关。近年研究发现：Ⅱ型程序性细胞死亡－自噬，与凋亡一起参与了缺氧性损伤后细胞命运的调控。由此我们推测：异丙酚预处理的肺保护效应，不仅与拮抗凋亡有关，可能也涉及对自噬的调控。基于此，本课题组拟采用原代培养的大鼠ATⅡ细胞缺氧模型，通过Western blot、免疫共沉淀及siRNA等技术，从细胞生存状态及胞内信号转导两方面，研究异丙酚预处理对缺氧ATII细胞自噬的影响及可能机制。从调控自噬的角度，为研究异丙酚在缺血缺氧性肺损伤中的保护作用提供实验依据。

肺缺血缺氧性损伤是临床常见的病理损伤，麻醉药用于肺损伤保护的研究一直备受关注。异丙酚是一种临床上广泛应用的静脉麻醉药，近年来因器官保护效应被广泛用于肺保护的研究。本课题组拟研究异丙酚预处理对缺氧早期II型肺泡上皮细胞自噬的影响及可能机制。我们首先验证了缺氧条件下会诱导II型肺泡上皮细胞自噬反应，异丙酚可以有效减少II型肺泡上皮细胞缺氧引起的自噬反应，20μmol/L是异丙酚的最佳作用浓度。其次我们通过药物干预实验，分别添加mTOR、PI3K抑制剂及ROS清除剂来阻断自噬调控环节，通过western blot的方法来检测II型肺泡上皮细胞内自噬相关蛋白LC3-I，LC3-II和Bnip3的表达。结果表明Bnip3在自噬过程中被诱导表达，mTOR信号通路参与缺氧诱导的自噬反应。之后我们采用siRNA技术观察Bnip3基因沉默对Bnip3可能涉及的自噬调控环节的影响，Western blot检测结果显示Bnip3基因的knock down可以有效减少缺氧条件引起的自噬反应。本研究从自噬的角度，为更好的开展自噬与肺损伤保护策略的研究提供重要的实验基础。