应用RNA干扰抑制猪繁殖和呼吸综合征病毒复制的实验研究

猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）是目前危害世界养猪业的重要病原之一，目前尚无有效控制方法，研究该病毒复制机制，探索新型防治技术十分必要。RNA干扰技术能对抗病毒或人工转入基因所表达mRNA等外源基因的侵害，具有特异、高效和持久的特点，在研究病毒基因功能、抑制病毒复制、清除病毒持续感染和有效控制病毒性疾病等方面具有十分广阔应用前景。本项目拟通过PRRSV不同分离毒株基因序列同源分析，根据PRRSV基因特征，设计合成10-15对siRNA，并转染Marc145细胞，以半定量RT-PCR技术、免疫染色、Western blot和病毒感染滴度测定技术，筛选出能抑制病毒复制的siRNA片段,明确该病毒复制过程中的RNA干扰现象；再以pSuper表达质粒构建成siRNA重组质粒，通过细胞转染试验，研究测定其对病毒的抑制作用，为预防和控制PRRSV感染提供一条新途径。