人新基因TINP1诱导增殖的机理和功能研究

TINP1（TGF-beta inducible nuclear protein 1）是一个功能未知的新基因，本中心首次利用荧光素报告基因－表型筛选系统证实其与细胞增殖相关，TINP1的超表达能有效地促进多种细胞尤其是肿瘤细胞的增殖。生物信息分析及实验验证TINP1是一个核蛋白，并且低浓度的TGF-beta刺激下能诱导其表达增加。本课题计划探究TINP1基因促增殖作用的信号转导通路，TINP1的表达与各种增殖相关信号通路之间的关系，阐明其表达调控的分子机理，揭示该基因与肿瘤之间的关系，探讨其作为一个潜在的新药物靶标的研究前景，为肿瘤发生的分子机制和治疗策略提供新的思路。

本项目通过三年的研究工作，已完成项目计划内容。此外为了达到项目研究目的，还重点对与细胞增殖有关的6条信号转导通路进行了研究，发现了TINP1在P53通路中可以明显促进pRL-TK-LUC的活性，有促进细胞增殖的作用。. 本项目的主要研究成果和结论：.（1）通过RT－PCR的检测发现，TINP1在淋巴细胞，以及各种癌细胞中的表达存在明显差异，这个又预示着TINP1基因功能的特异性。.（2）通过cck8实验和细胞周期检测验证了TINP1为促进细胞增殖相关基因，为研究这个基因的功能奠定了一定的基础。从能够替代酿酒酵母中同源物Nsa2，发挥相似促细胞生长功能。. （3）RT-PCR和Northern结果发现TINP1在多种正常及癌组织和细胞系中表达的显著差异性，揭示了人TINP1基因生理功能的广泛性和重要性。而其的核仁定位和S8结构域的存在，也揭示着可能对于蛋白的表达以及调控起.（4）荧光倒置显微镜分析显示人TINP1基因与核仁存在共定位。而其的核仁定位和S8结构域的存在，也揭示着可能对于蛋白的表达以及调控起.（5）TINP1在超表达情况下能有效地促进多种细胞特别是肿瘤细胞的增殖。与空载体对照相比TINP1能够明显的促进细胞增殖，并且可能与p53相关，TINP1可以促进S期细胞增多，并引起细胞增殖.（6）从WB的结果可以看出TINP1可以抑制p53的表达，并且增强JNK的蛋白表达水平。TINP1在P53通路中可以明显促进pRL-TK-LUC的活性，有促进细胞增殖的作用。.（7）与TINP1相比，TINP1-ΔNLS2的亚细胞定位更多呈现为核仁定位（Zhang H, et al. Biochemical and Biophysical Research Communications. 2010; 391: 651–658.）.（8）与TINP1相比，TINP1-ΔNLS2对于六条信号通路都有增强的效果。但与TINP1相比，TINP1-ΔNLS2对于细胞增殖的促进作用有所减弱。TINP1-ΔNLS2对于周期抑制基因p53和p21的抑制有所减弱，而对周期促进基因cyclinE、cyclinD和CDK6的促进也有所减弱。与TINP1-ΔNLS2对细胞增殖作用有所减弱结果一致。