基于Nrf2/ARE通路的当归超临界提取物癌症化学预防作用有效组分的确认及机理研究

Nrf2/ARE通路是癌症预防的重要机制，也是评价潜在癌症预防药物的可行手段。本课题组在前期研究中发现当归超临界提取物具有通过Nrf2/ARE途径增加细胞抗氧化、抗炎症能力的作用，可能具有癌症预防的能力，是开发癌症化学预防药物的潜在资源。本项目拟在前期研究基础上，采用分子蒸馏技术，进一步分离当归超临界提取物，以GC-MS确定各馏段成分，再对不同馏段进行Nrf2/ARE通路相关的生物指标测定，综合分析化学指标与生物指标间的相关性，确定有效组分，阐明作用机理，并采用自发前列腺癌模型小鼠验证筛选组分的癌症预防作用。该课题的研究将为开发当归中作为癌症预防药物的有效部位或成分提供试验依据，也为从中药中筛选癌症化学预防药物提供可行的评价体系。

本课题采用分子蒸馏技术将当归超临界提取物分馏得到6个馏分；并建立了GC-MS分析方法，对总提取物、各馏分及分馏后剩余部分进行成分组成分析及表征。本课题首次采用HepG2-ARE-C8细胞株及LPS诱导的RAW264.7细胞株对总提取物及各馏分进行抗氧化、抗炎相关生物指标的测定。最后通过AOM/DSS诱导的小鼠炎症相关结直肠癌模型验证体外实验结果。研究发现，当归超临界提取及其各馏分表现出不同程度的激活ARE报告基因、启动并增强Nrf2/ARE通路调控的Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因HO-1、NQO1及蛋白表达，增加细胞对氧化应激的抗性。另外表现出不同的抗炎能力，即抑制炎症因子NO、PGE2的释放及相关炎症因子iNOS、COX-2基因及蛋白表达。结合成分分析与生物指标分析结果，发现当归超临界提取物中各酯类成分在一定比例下，存在协同作用，表现出更强的抗炎、抗氧化作用。比较当归超临界提取物及各馏分的抗氧化及抗炎作用，发现其中130℃条件下的馏分（即馏分4）较总提取物及其他馏分作用更强。说明馏分4可能是当归超临界提取物癌症化学预防作用的主要有效组分。动物实验发现当归超临界提取物及馏分4均能够抑制小鼠结直肠癌的发生发展，且馏分4表现出更强的作用。动物实验结果与体外细胞结果一致，说明本课题建立基于Nrf2/ARE通路的抗氧化模型与抑制炎症综合细胞筛选模型作为从中药组分中筛选潜在癌症预防药物评价体系具有可行性。达到了预期研究目的。. 本课题组发表标注论文7篇，其中SCI收载2篇、国内核心期刊5篇。培养硕士研究生3名。参加学术会议交流3次。