基于TLR4/NF-κB通路的解毒化瘀通腑法干预内毒素性肝损伤的作用机制

In patients with acute and chronic severe hepatitis,cirrhosis of the liver and so on, tend to merge endotoxemia,Endotoxemia is one of the main factors leading to the disease rapidly progress and difficult to reverse.TLR4/NF-κB signal transduction pathway plays a key role in endotoxin-induced liver injury.At present there is no effective drugs for the treatment of endotoxemia, preliminary work shows jiedu huayu tongfu method can effectively improve liver function, delay the progress of the disease,but the lack of further study on mechanism of action. Therefore , the issue with TLR4/NF-κB signal pathway as the main line, through the jiedu huayu tongfu method intervene endotoxin-induced liver injury model in rats,to observe the liver tissue pathological changes and the changes of inflammatory factors TNF-a, IL-1β, IL-6 and endotoxin level;Effect of expression about jiedu huayu tongfu method on TLR4/NF-κB pathway upstream and down stream molecule CD14, TLR4, MyD88, IKK, NF-κB,In order to prove the hypothesis of jiedu huayu tongfu method is affected by the transmission of TLR4/NF-κB inflammatory cascade signal pathway, inhibiting activation of NF-κB, alleviate the damage of endotoxin on body, to explore the mechanism of jiedu huayu tongfu method intervention in endotoxin-induced liver injury, further understand the dominant part and curative mechanism of Chinese medicine for the treatment of endotoxemia.

在急、慢性重型肝炎、肝硬化等患者中, 往往合内毒素血症，内毒素血症是导致病情急剧进展、难以逆转的最主要因素之一。TRL4/NF-κB是内毒素所致肝损伤中起关键作用的信号转导通路。目前临床尚无有效治疗内毒素血症的药物，前期工作显示解毒化瘀通腑法能有效的改善肝功能，延缓病情进展，但缺乏进一步作用机制的研究。因此本课题以TRL4/NF-κB信号通路为主线，通过解毒化瘀通腑法干预内毒性肝损伤大鼠模型，观察肝组织病理改变，炎症因子TNF-a、IL-1β、IL-6及内毒素水平变化；解毒化瘀通腑法对TRL4/NF-κB通路上下游关键分子CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB表达的影响，以论证解毒化瘀通腑法是通过影响TRL4/NF-κB通路炎症级联信号的传递，抑制NF-κB的激活，减轻内毒素对机体损害的假说，探讨其干预内毒素性肝损伤的作用机制，更深入认识中医药治疗内毒素血症的优势环节和机理。

在急、慢性重型肝炎、肝硬化等患者中，往往合并肠源性内毒素血症，内毒素血症是导致病情急剧进展、难以逆转的最主要因素之一。TRL4/NF-κB是内毒素所致肝损伤中起关键作用的信号转导通路。目前临床尚无有效治疗内毒素血症的药物，前期工作显示解毒化瘀通腑法能有效的改善肝功能，延缓病情进展，但缺乏进一步作用机制的研究。因此本课题以TRL4/NF-κB信号通路为主线，利用LPS/D-GaLN构建内毒素肝损伤大鼠模型，应用中药解毒化瘀通腑方高、中、低剂量干预模型大鼠，并设置空白组、模型组、TLR4抗体组作为对照，采集大鼠血清、肝组织标本，结果显示在造模后大鼠血清内毒素、ALT、AST及相关炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高，肝组织中TLR4mRNA、NF-κBmRNA的表达增加；TLR4/NF-κB通路中CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达亦显著升高，肝组织病理可见肝细胞明显的坏死、变性、炎性细胞浸润，与空白组及TLR4抗体组差异明显，中药干预组（特别是中药高、中剂量组）可明显降低模型大鼠ALT、AST、内毒素水平；ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平，显示在同一时间点中药组的TNF-α、IL-1β、IL-6的水平都低于模型组；RT-PCR法检测肝组织TLR4mRNA、NF-κBmRNA表达，结果显示中药组的表达同样低于模型组，中药高剂量组表达水平与TLR4抗体组接近；Western-Blot法检测肝组织CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达，结果表明中药干预组可降低CD14、TLR4、MyD88、IKK、NF-κB的蛋白表达水平，中药高剂量组与模型组有显著差异。在肝组织病理方面，中药干预组在同一时间点的肝损伤程度低于模型组，证实了解毒化瘀通腑方可通过影响TLR4/NF-κB通路炎症级联信号的传导,抑制NF-κB的激活，减少炎症递质及细胞因子的释放，从而减轻内毒素对机体的损害，起到肝细胞保护作用的假说，这为临床应用解毒化瘀通腑中药干预内毒素性肝损伤提供了有力的借鉴，从而可以指导临床治疗。