CD30在慢性移植肾排斥反应淋巴组织增生中的作用和机制研究

器官移植是挽救终末期器官功能衰竭患者的最有效手段。慢性排斥反应（CR）是威胁移植受者和移植物长期存活的最主要原因，其发生机制尚不清楚。移植物内暂时性淋巴组织再生是目前CR机制研究的焦点。针对CD30在CR血清中显著增高，但机制不清的现状，提出CD30可能通过直接作用和调节IL-12分泌的方式诱导Tfh细胞分化进而促进CR淋巴组织再生的假说。本项目拟采用大鼠腹主动脉移植CR模型，通过T细胞分化诱导培养和淋巴组织再生干预试验，分别研究sCD30、CD30L、CD30L-Ig和CD30-Ig蛋白对Tfh细胞比例和IL-12、IL-21及其相关信号转录因子STAT4和Bcl-6表达的影响；并进一步应用RNA干扰法分别敲低CD30L和IL-12基因，进行体内和体外对比研究，探索CD30在CR淋巴组织再生免疫应答中的作用及其分子机制，为CR淋巴组织再生机制的研究奠定基础，为CR的临床治疗提供思路。

本项目以探索CD30在移植肾慢性排斥反应（chronic rejection, CR）淋巴组织再生中的作用及分子机制为主线，对CD30在淋巴组织再生及CR发生中的作用机制进行了研究。首先应用Luminex对95细胞因子/趋化因子及其可溶性受体在CR组和对照组血清中的浓度进行了检测和对比分析，筛选出sCD30、sTNFRⅠ等21种CR相关因子。其中，sCD30在CR组血清中的浓度显著升高。sCD30浓度与sRAGE、sTNFRⅠ、sTNFRⅡ、IL-12p40、MIP1d、Eotaxin2、Eotaxin3和IL-20相关。其次，检测了CD30及其配体CD153在肾移植患者PBMC上的表达，发现CR组CD30在T细胞和B细胞上的表达均显著低于对照组，而CD153在T细胞的表达显著高于对照组，结合sCD30在CR病人血清中的浓度明显升高的结果，提示有必要进一步研究CD30与移植免疫耐受的相关性。再次，研究了CD30与增生淋巴组织（Tertiary lymphoid organ，TLO）的相关性，发现27.6%的CR移植肾组织中存在TLO，但很少存在生发中心，与C4d沉积不相关，提示移植肾组织中的TLO可能缺乏产生抗体的能力。TLO与移植肾存活时间正相关，但TLO中几乎不存在调节性免疫细胞，且TLO与IL-17表达正相关，与CXCR5表达负相关，提示TLO可能是慢性炎症反应的伴随现象。发现Th1样Treg细胞在早期移植免疫耐受中发挥重要作用。发现CD30与TLO的发生及抗体产生不相关，与Tfh细胞和Tfr细胞密切相关，与Th1样Treg细胞正相关，与Th17细胞负相关。CR移植肾组织的TLO中存在CD30和Foxp3双阳性细胞。最后，发现肿瘤坏死子家族APRIL及其受体TACI表达于TLO周围，与CR淋巴组织增生相关。综上，本项目发现淋巴组织再生很可能是一种慢性炎症反应的伴随现象，CD30与TLO的发生及抗体产生无关，但可能通过调节Th1样Treg细胞的IFN-γ分泌和Tfr细胞参与移植免疫耐受，在CR体液免疫负调控机制中发挥重要作用。APRIL及其受体可能在浆细胞介导的CR体液免疫机制中发挥重要作用。本研究为CR发生体液免疫机制研究提供了新的线索，并对CR的临床治疗研究具有一定的推动作用。