涎腺腺样囊性癌中Jab1调控Runx3蛋白的分子机制研究

Runx3蛋白细胞浆异位和降解与涎腺腺样囊性癌的发生、远处转移和预后密切相关，其亚细胞分布和降解机制尚未阐明，本研究运用细胞培养、质粒转染、IP及Western蛋白印迹、siRNA干扰、免疫荧光化学和免疫组织化学等方法检测Jab1、JNK/磷酸化JNK、RUNX3、P27、Smad4在腺样囊性癌细胞株中的表达水平，明确致癌蛋白Jab1对Runx3亚细胞分布及表达的影响，分析组蛋白脱乙酰基酶HDAC-1和KAP-1转录中介因子在Jab1介导的Runx3表达的影响中可能的作用机制，为深入探讨Jab1的功能奠定理论基础，对揭示阐明Runx3蛋白失活导致的TGF-β信号通路异常引起肿瘤发生机制有重要意义，同时运用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型进行预后分析，为临床上肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。

本研究通过基因转染检测腺样囊性癌细胞株SACC-83中Jab1与Runx3的表达相关性，并通过qRT-PCR、Western blot、免疫组织化学检测涎腺腺样囊性癌(SACC)中Jab1、Runx3、 P27kip1和磷酸化P27kip1 的表达水平及相关性，同时分析其表达水平与临床病理因素的相关性，并分析影响预后的可能相关因子。结果表明：(1)、在SACC-83中存在Jab1的表达，而Jab1 siRNA转染SACC-83细胞株后显著抑制Jab1的表达，而Runx3、P27kip1和Smad4的表达则显著提高，而抑制Cyclin D的表达，说明在SACC-83细胞株中Runx3的表达受到Jab1的调控，其调控机制可能与细胞周期相关因子有关；(2)、qRT-PCR结果表明，SACC中Jab1表达增高，而Runx3和P27kip1表达明显降低，由于Jab1调控P27kip1的表达，从一定程度上说明SACC中Jab1调控Runx3的表达；(3)、Western Blot结果表明SACC中Jab1的表达量显著高于正常涎腺的表达，而SACC中Runx3、P27kip1和磷酸化P27kip1的表达量显著低于正常涎腺中的表达量，同样提示SACC中Jab1调控Runx3、P27kip1和磷酸化P27kip1的表达；(4)、免疫组织化学结果表明在正常涎腺细胞核中Jab1呈弱表达，而Runx3、P27kip1 和磷酸化P27kip1均呈强阳性表达；而在SACC中Jab1呈强表达，Runx3、P27kip1 和磷酸化P27kip1均显著抑制，Jab1高表达与Runx3低表达呈显著相关(P=0.001)，揭示了SACC中Jab1调控Runx3的表达。同时也验证了Jab1是细胞周期相关因子P27kip1 和磷酸化P27kip1的调控因子；(5)临床病理因素与Jab1和Runx3表达相关性分析表明Jab1高表达与肿瘤病理类型和远处转移存在显著相关性，而Runx3低表达与肿瘤的病理类型、淋巴结转移、远处转移和临床T分期存在显著相关性，说明Jab1高表达和Runx3低表达在肿瘤的进展及远处转移方面具有重要的调控作用；(6)、生存模型分析表明，淋巴结转移阳性、远处转移、及Jab1高表达和Runx3低表达与患者的预后存在显著相关性。