消炎利胆片调控胆汁酸代谢稳态与氧化应激防御通路治疗湿热证胆汁淤积的作用机制及配伍研究

According to recent advance for mechanism research and theoretical advantages of Chinese Medicines for cholestasis, together along with our previous researches, we present the scientific hypothesis for this project as “Metabolic disequilibrium of endogenous bile acids is closely related with cholestasis diseases. The possible curative mechanisms of Xiaoyan Lidan Tablets for these diseases would be by promoting bile excretion with regulating synthese, metabolism and transportation of bile acids, and protecting liver by activating anti-oxidative stress pathway with coordinating effects of three drugs of Bitter and Cold in nature.” Therefore, metabonomic characters of endogenous bile acids, intervening effects upon targets of FXR (farnesoid X receptor) and Nrf2 (nuclear factor erythroid 2) relating signaling pathways and Kinetics characters of Xiaoyan Lidan Tablets and different drug combinations would be investigated and compared systematically. The results are prospected to clarify the mechanisms for pharmacological and compatibility mechanisms of Xiaoyan Lidan Tablets for cholestasis of Damp-heat syndrome, and apply scientific guidance for clinical use.

依据胆汁淤积药物作用机制最新进展和中医药“保肝利胆”的特色优势，结合前期基础，本项目提出“内源性胆汁酸代谢失衡与胆汁淤积病程密切相关；干预胆汁淤积状态下机体胆汁酸合成、代谢转运，以促进胆汁排泄，启动内源性抗氧化应激通路调控下游保护性细胞因子的表达，以抵抗肝损伤，可能是消炎利胆片治疗湿热证胆汁淤积的重要机制；三味苦寒药物相须配伍，具有协同效应”的科学假说。项目拟采用代谢组学(内源性胆汁酸代谢组学)方法，阐明胆汁淤积与胆汁酸代谢失衡的关系；采用组织形态学、分子生物学(受体、转运体、炎症因子的表达)、体内药物分析学(药效成分代谢、分布、消除特征)，从干预FXR通路，促进胆汁外排和启动Nrf2通路保护肝损伤两个方面，阐明消炎利胆片治疗胆汁淤积的作用机制(途径及靶点)；从不同配伍的拆方样品对整体药效、靶点以及药效成分体内过程的影响等三个层面，揭示组方的配伍原理。为消炎利胆片的合理用药提供科学依据。

本项目按照项目申请书和资助计划书完成研究任务，采用近年来新兴技术手段丰富本项目的研究内涵及增加研究结果的可靠性，项目进展顺利，并超额完成预期的研究目标，概述如下：.（1）完成了消炎利胆方样品制备及其质量控制，采用UPLC-Q-TOF-MS/MS液质联用谱技术和HPLC法分别构建消炎利胆片实验制剂及各拆方样品的化学成分库和测定样品中主要成分含量，制订了切实可行的含量限度和特征指纹，为动物和细胞实验用制剂及拆方样品的质控标准。.（2）应用网络药理学和计算机模拟分子对接方法预测消炎利胆片干预胆汁淤积的作用机制，结果提示消炎利胆片调控胆汁酸代谢相关信号通路和抗炎抗氧化为其作用的主要机制。.（3）后续实验研究部分采用ANIT诱导的胆汁淤积模型进行验证，观察内源性胆汁酸代谢轮廓变化与胆汁淤积病程相关性，结果显示胆汁淤积大鼠的血清、肝脏和胆汁中胆汁酸代谢紊乱，与肝内胆汁淤积并导致肝脏病理损伤的病理进程相一致，其机制与FXR及其下游调控胆汁酸代谢关键靶标的表达失控有关。.（4）消炎利胆方及其拆方对湿热证胆汁淤积模型大鼠的干预作用及机制研究，通过经拆方配对和单味药研究比对显示，单味药中溪黄草对促进胆汁酸外排和改善肝脏炎症的效果的贡献较大，其经与穿心莲和苦木配伍后，可增加其促胆汁酸外排和抗炎效果，当三味药配伍使用后，最大程度上发挥缓解胆汁淤积的作用。.（5）研究了消炎利胆片及其拆方药效成分在正常和胆汁淤积大鼠药代动力学比较，通过药效成分体内代谢过程研究，揭示消炎利胆片配伍前后药效成分体内过程的差异，明确药物相互作用的规律和特点。结果显示，相比于单方，在ANIT诱导的胆汁淤积模型组中，XYLDT中的活性成分的药时曲线下面积皆升高，表明溪黄草、穿心莲与苦木等三味药配伍使用后可能通过提高有效成分在体内的血药浓度，进而会提高各有效成分的生物利用度，进一步阐明了消炎利胆片配伍的科学内涵。.本项目超额完成了预期的考核指标。截至2020年12月31日，以通讯作者身份在国内外核心期刊已发表研究论文全文12篇，其中SCI收录8篇；培养博士2名和硕士3名；项目执行期间申请国家发明专利5项，其中获授权2项。