hARD1蛋白与p53蛋白相互作用研究

human Arrest Defective 1 (hARD1)是一个与酵母细胞ARD1蛋白同源、从酵母到高等哺乳细胞都很保守的蛋白，它具有N-乙酰基转移酶活性，对蛋白质进行翻译后的N-乙酰基化修饰。已有的研究确定它与细胞增殖和某些肿瘤发生有关，但其作用机制至今不清楚。作为N-乙酰基转移酶，确定hARD1的乙酰化修饰靶蛋白是研究其功能以及作用机制的重要环节，但至今没一个ARD1的靶分子被完全确定。本研究小组在前期的研究中发现p53蛋白可能是hARD1蛋白乙酰化修饰的靶蛋白。本研究将明确ARD1蛋白对p53蛋白的乙酰化修饰作用以及对p53功能的影响。由于p53蛋白在肿瘤发生中具有重要的地位，因此本项目的完成将有助于解释ARD1在肿瘤发生中的作用机制。

hARD1蛋白是一个N乙酰基转移酶，能催化细胞内多种蛋白质乙酰化，是蛋白质活性调控的一种重要方式。前期研究发现hARD1蛋白的表达能促进细胞的增殖，在乳腺肿瘤、前列腺癌及肺癌中有较高频率的表达，初步的研究发现hARD1可能与p53蛋白相互作用，从而调控细胞的增殖。本项目通过转基因和免疫共沉淀等方法确定hARD1与p53蛋白的相互作用。项目2010年1月立项，经过3年的努力，严格按项目研究计划进行，现已完成项目计划所要求的全部研究内容。项目研究中主要开展了以下几方面的研究工作1. hARD1对p53基因表达的影响，选择了6株乳腺癌细胞及3株正常细胞株，检测了各不同细胞株中细胞内源性hARD1和p53蛋白的表达水平，发现在MCF-7和293细胞可同时表达hARD1和p53蛋白。进一步研究发现在293细胞中内源性p53蛋白的表达水平不受hARD1的影响。2.确定了hARD1与p53蛋白的相互作用；用免疫共沉淀的方法证明了hARD1蛋白与p53蛋白之间存在于同一个复合体中。通过酵母双杂交实验也证明了hARD1与p53蛋白存在直接的相互作用。3.明确了hARD1对p53蛋白的乙酰化修饰作用；用转基因的方法证明了hARD1蛋白的过强表达能提高p53蛋白的乙酰化水平，但p53蛋白水平并没有明显的变化。同时检测发现p53蛋白的泛素化水平也没有明显的变化。表明hARD1对p53蛋白的乙酰化修饰并没有影响p53蛋白的稳定性和泛素化降解，它是否对p53蛋白的活性产生影响还有待进一步研究。4. hARD1的表达水平与细胞生长和肿瘤的发生和预后的关系研究。研究发现hARD1的表达水平与乳腺肿瘤的发生，发展和恶化程度有关。同时还发现在乳腺癌中hARD1的表达变化与淋巴转移和雌激素受体有关。5. hARD1通过与雄性激素受体AR的结合和乙酰化修饰作用调控前列腺癌的作用机制研究。6.研究中还发现hARD1也能与雌激素受体α（ERα）相互结合，可能介导激素敏感性的乳腺癌的发生，为进一步深入开展雌激素介导的乳腺癌发生的分子机制研究奠定了基础。本项目执行期间发表并标注本项目基金号的论文有6篇，其中5篇SCI，1篇中文核心期刊，与本项目直接相关的论文有3篇，最高影响因子达9.5（PNAS），还有1篇正在撰写中。培养博士研究生3名，硕士研究生6名，圆满并超额完成了预期的研究任务。