染料木黄酮对小鼠卵母细胞成熟的影响及其作用机制研究

染料木黄酮(genistein, GEN)是一种重要的大豆异黄酮，研究证明，GEN可干扰卵母细胞的体外成熟过程，但其作用机制尚不明确；此外，GEN对整体动物染毒是否影响卵母细胞的体内成熟也未见报道。本课题拟以小鼠卵母细胞为对象，研究GEN对卵母细胞成熟的影响。首先，用GEN对动物染毒，评价卵细胞体内成熟及受精能力；同时观察血浆、卵巢匀浆中GEN和相关激素水平，检测卵母细胞和颗粒细胞中雌激素受体（ER）的表达；检测卵成熟过程中重要细胞器的结构与分布以及成熟促进因子（MPF）和丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路的变化，从细胞、亚细胞和分子水平探讨GEN对卵细胞成熟的影响。最终在整体水平上判定GEN对卵母细胞体内成熟的影响，并探讨卵泡内因素，尤其是ER在其中的作用。其次，根据体内研究结果，在体外进行卵泡培养，对体内实验结果进行验证。本研究结果将为进一步探讨GEN的生殖毒性提供实验与理论依据。

染料木黄酮(genistein, GEN)是一种重要的大豆异黄酮，研究证明，GEN可干扰卵母细胞的体外成熟过程，但其作用机制尚不明确；此外，GEN对整体动物染毒是否影响卵母细胞的体内成熟也未见报道。本课题以小鼠卵母细胞为对象，研究GEN对卵母细胞成熟和活化能力的影响，并探讨其可能的作用机制。结果表明，GEN可抑制小鼠卵母细胞第一极体（PB1）释放；明显干扰小鼠卵母细胞成熟过程中纺锤体的结构，干扰皮质颗粒（CGs） 的再分布和无皮质颗粒区的形成；影响成熟卵母细胞的孤雌活化能力；但GEN处理对小鼠体内FSH和E2水平无显著影响。蛋白检测结果显示，GEN抑制了小鼠卵母细胞成熟过程中的ERK蛋白的磷酸化水平和Cyclin B1蛋白表达；此外，GEN还可促进卵母细胞雌激素受体（ER）α蛋白的表达。体外研究结果也对上述结果作了进一步确认。此外，体外研究结果还表明，用ER阻断剂处理后，GEN对卵母细胞的抑制作用不再存在，提示GEN可能是通过ER介导信号通路来发挥作用的。卵裸与颗粒细胞共培养结果显示，颗粒细胞是介导GEN抑制卵母细胞成熟的一个重要因素。本研究结果将为进一步探讨GEN的生殖毒性提供实验与理论依据。