升降散对流感病毒性肺炎小鼠肺肠免疫机能的干预

On the basis of the protection of Shengjiang San in mouse with pneumonia induced by influenza virus,the motor function and the morphologic variations of lung and large intestine will be observed,followed by observation of the content of SIgA in Bronchoalveolar lavage fluid and Large intestine mucus, the bronchus ICAM-1 and NF-kBmRNA,the large intestine CD4+、CD8+、5-HT、SP、VIP,and inflammatory cytokines。The tervention of Shengjiang San on immune function of lung and large intestine in mouse with pneumonia induced by influenza virus will be proclaimed at the molecular level.In the guidance of TCM compatibility theory,the above indexes will be observed in different medicine groups,the correlation between lung and intestine index will also be observed. Tcm individualation Kaishang Xiexia will be researched as a basic rule of treatment of respiratory viral disease.

本课题在观察升降散对流感病毒性肺炎小鼠及呼吸器官肺保护作用基础上，用生物机能实验系统传感器、光电镜观察其对流感病毒性肺炎小鼠肺肠运动机能及形态学的影响，进而采用免疫组化、原位杂交、双抗体夹心ELISA等指标检测技术，观察对流感病毒性肺炎小鼠肺灌洗液、大肠粘液中SIgA含量的变化；支气管上皮细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肺组织NF-kB、支气管上皮细胞中NF-kBmRNA的表达及小鼠大肠及PP结中CD4+、CD8+T淋巴细胞数量，5-羟色胺(5-HT)、P-物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)的相对含量；对血清炎症相关细胞因子分泌的影响，从分子水平明确升降散治疗病毒性肺炎的肺肠免疫调节机制；进而在中医药配伍理论指导下，对升降散进行拆方研究，明确不同拆方组对以上指标的影响；进而分析肺肠两方面指标的相关性。以方示法揭示开上泄下法的配伍机制，探求治疗病毒性肺炎乃至呼吸道病毒感染的基本治法。

病毒感染性疾病呈增长趋势，抗病毒药物及疫苗的研制难以跟上病毒种类的变化。在西医传入我国以前时至今日中医药防治重大传染病保障中华民族繁衍昌盛所取得的成绩，使人坚信，在治疗病毒感染性疾病这一领域里，中医药有着得天独厚的优势及广阔的发展前景。有研究表明，从临床防治流感、抗击非典的经验来看，综合类方剂配伍组合应用以治温名方升降散居第一位。本课题以流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠造成病毒性肺炎为模型，首先观察FM1感染小鼠一般状态、死亡情况、肺指数、肺干湿质量比、肺组织外观形态、光、电镜病理变化以及升降散对以上方面改善效用情况，在此基础上，观察了FM1感染小鼠肺肠运动功能及免疫状态，对升降散展开了全方、拆方、配伍它方等不同配伍环境下作用的观察。结果表明：升降散能减轻FM1感染肺炎小鼠的全身症状，抑制体质量减轻，降低死亡率和肺指数，提升肺干湿质量比，降低肺组织病理学评分和改善肺泡Ⅱ型细胞结构的病理损伤；降低FM1感染小鼠的呼吸频率，增加潮气量、通气量、呼吸流速以改善呼吸功能，增加小肠的推进率、回肠和结肠的运动频率与幅度，促进肠道5-HT、SP分泌量，抑制VIP分泌以调节肠运动功能；能显著提升FM1感染小鼠支气管肺泡、大小肠灌洗液中sIgA含量，降低血清IL-1β、IL-6，TNF-α含量，升高IL-10、IL-lrα、sTNFR的含量、全血CD4＋百分比、CD4＋/CD8＋值及胸腺指数；显著降低FM1感染小鼠小鼠肺组织ICAM-1、NF－κBp65蛋白及mRNA表达，提升回肠CD4＋的表达；各项观察指标的改善，呈现出升降散组作用优于各拆方组、合方组作用优于升降散、中药对照单方组的作用趋势。结论：升降散全方对流感病毒感染小鼠有一定保护作用，通过增加黏膜分泌IgA，调控炎性因子和抗炎因子的平衡及提高T 细胞亚群的比值，抑制病毒性肺炎小鼠肺组织ICAM-1、NF-κBp65的过度表达，从而减轻肺损伤，这是其改善肺部炎症保护小鼠的机制之一，也是升降散开上与泄下协同、升清降浊治疗病毒性肺炎效用的微观机制，是对中医肺肠相关理论的有力阐释。同时升降散能有效提升中药对照组的效用，这也有力地说明了升降散可以作为治疗病毒性肺炎的基本配伍用方，以方示法，开上泄下法可以作为病毒性肺炎乃至呼吸道病毒感染的基本治法，为临床探寻规范性、广适性方药治法做些指导。