纤维连接蛋白在卵巢癌多细胞团簇形成中的作用

卵巢癌是死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤，近来大量研究证实卵巢癌腹水中存在的卵巢癌多细胞团簇与卵巢癌腹腔内广泛侵袭转移、化疗耐药及复发密切相关，故本研究以卵巢癌多细胞团簇形成为立足点、以卵巢癌腹水中存在大量与细胞黏附相关的纤维连接蛋白为切入点，采用液体重叠三维培养技术和卵巢癌腹水瘤模型观察体内、外纤维连接蛋白对卵巢癌多细胞团簇形成的作用，并进一步明确与其作用相关的细胞表面黏附分子（整合素受体）；通过动物模型初步探讨纤维连接蛋白抗体能否逆转卵巢癌腹水中癌细胞团簇的形成以及对卵巢癌腹腔化疗疗效的影响。该课题旨在阐明卵巢癌腹水中癌细胞团簇形成的分子机理，为破坏癌细胞团簇的形成提供分子靶标，探索有效治疗卵巢癌的新途径。

卵巢癌死亡率在妇科恶性肿瘤中居首位，肿瘤细胞脱落后以两种形式弥散于腹腔:形成实体瘤或以多细胞团簇（MCA）悬浮于腹水中。腹水中的MCA在卵巢癌粘附、侵袭和转移过程中起重要作用。方法:本研究用液体重叠技术培养SKOV3和OVCAR-3两种卵巢癌细胞株，得到MCA后运用纤维连接蛋白（FN）、FN单抗、RGD、RGE等进行干预，寻找能识别FN并在卵巢癌细胞表面高表达的整合素受体；利用裸鼠进行体内试验建立人卵巢癌腹水瘤模型，用FN及顺铂（DDP）进行干预，分析两者对裸鼠体内肿瘤和腹水形成的影响,探讨卵巢癌MCA形成的相关因素，为寻求提高卵巢癌疗效的新方法奠定基础。结果:8位卵巢癌患者腹水中的FN含量均值为263.65±83.23(μg/ml)，大量肿瘤细胞以MCA形式散在；SKOV3和OVCAR-3的最佳团簇形成时间是第9天和第6天；最佳FN作用浓度分别为10ug/ml和20ug/ml，且FN组和RGE组均生长最快；DDP处理前两种细胞株的单层细胞组和MCA组各细胞周期存在明显差异（P<0.05），DDP作用后两种细胞株中MCA的凋亡率均明显增加（P<0.05），而周期分布情况，SKOV3的两组细胞差异不明显（P>0.05）,OVCAR-3中MCA组的G2+M期细胞比例减少（P<0.001）；整合素受体α3β1、α4β1、α5β1在两种细胞中均有表达且以α4β1为主（P<0.05）；两种细胞团簇组各整合素表达均高于单层细胞组（P<0.05）；加入FN后，SKOV3的α4β1和α5β1表达明显增加（P<0.05），而OVCAR-3各整合素的增加差异不明显（P>0.05）。本研究裸鼠卵巢癌腹水瘤模型成瘤率为100%；用DDP和FN干预后，FN组裸鼠的肿瘤总数和腹水量均明显超过生理盐水组和DDP组（P<0.05),而DDP组裸鼠的肿瘤总数和腹水量明显少于FN组（P<0.05)。结论:卵巢癌患者腹水中FN浓度较高，为寻求鉴别良恶性积液的新方法提供实验基础；体外实验说明FN对卵巢癌MCA的形成具有明显的促进作用，而FN单抗和RGD肽段可抑制MCA形成；在两种细胞株表面均以α4β1表达为主，FN可明显促进它的表达；动物实验证实裸鼠卵巢癌腹水瘤模型能较好地模拟卵巢癌的自然发生和转移途径，FN对体内种植的肿瘤细胞也具有明显的促生长作用和成瘤作用，而DDP能有效抑制肿瘤的生长和腹水的形成。