功能化开管毛细管色谱柱制备及其在复杂生物样本的磷酸化蛋白质分析中的应用研究

建立一种用于液质联用在线分析复杂生物体系中磷酸化蛋白质的新方法，即采用功能化开管毛细管柱选择性富集和分析磷酸肽的新方法。通过制备新型的单层及多层开管毛细管柱，对其功能化并用于磷酸化蛋白质的特异性富集。通过对开管毛细管柱柱径、柱长、进样流速、富集过程中上样及浸洗缓冲液的影响、对磷酸化肽段的选择性等进行考察，对各个关键步骤进行优化，确定出最佳实验条件，并检验方法的动态范围和重现性。在此基础上，插入非磷酸化标准蛋白质对方法进一步检验，以观察在非磷酸化肽段的干扰下对磷酸化肽段的富集效果。然后将该方法用于本研究室模式生物小组提供的鼠肝再生细胞蛋白提取液中的磷酸化蛋白质分析。通过对实验结果进行综合分析，寻找磷酸化蛋白质的磷酸化位点，并对磷酸化蛋白质的生物学功能进行初步研究，为病理研究、诊断和治疗提供依据，同时为磷酸化蛋白质的方法学研究提供一种新的研究思路。