基于"IL-17A/IL-17F"细胞通讯轴的生物学行为及信号传导探讨化瘀通络法改善血瘀微环境的机制

The purpose of this research is basing on pelvic inflammatory disease sequelae (SPID) blood stasis microenvironment, and discussing the cell biology effects and signal control mechanism of TCM therapy in pelvic blood stasis microenvironment in sequelae of pelvic inflammatory disease via stasis-reducing and venation-flowing method. We first time propose a new concept of the pelvic blood stasis microenvironment. Blood stasis can result in pelvic blood stasis microenvironment, which would deteriorate the blood stasis and inflammation. In that reason, the blood stasis microenvironment is the bridge between the blood stasis and inflammation. We establish the new evaluation system, combined the unified thing model of TCM with the latest progress of immunology, molecular biology of western medicine. Using this system, we estimate the blood flow rate and vascular remodeling statement. With the help of proteomics, we understand the relationship between the blood stasis microenvironment in SPID and "IL-17A/IL-17F" pathway. At the last, establishing the three-dimensional culture system in vitro, we preliminary discuss the TCM therapeutic target in cellular level. This study systematically clarify the mechanism of the stasis-reducing and venation-flowing method treating in pelvic blood stasis microenvironment of SPID and we supplement the stasis-reducing and venation-flowing method as a new academic bases that would provide a more effective therapy in clinial.

本项目的研究思路是以盆腔炎性疾病后遗症（SPID）血瘀微环境为研究载体，基于"IL-17A/IL-17F"细胞通讯轴的生物学行为及信号传导，探讨化瘀通络法改善血瘀微环境的机制。首次提出"血瘀微环境"的新理念，血瘀可导致血瘀微环境，而血瘀微环境又加重血瘀及炎症的程度，故而血瘀微环境是炎症与血瘀之间的桥梁。我们推测"IL-17A/IL-17F"细胞通讯轴的生物学及信号转导的改变是导致血瘀微环境产生和加重的关键。提出"化瘀通络法"可通过细胞通讯轴改善及治疗血瘀微环境的工作假说。拟建立以祖国医学整体思维模式与现代医学相结合的评价体系，评价血流运行及血管重建水平；运用蛋白组学技术，了解分析血瘀微环境与细胞通讯轴的关系；建立体外三维培养体系，初步探讨"化瘀通络法"改善血瘀环境在细胞层面的作用靶点。以期系统地阐明化瘀通络法在改善SPID血瘀微环境的作用机制。

盆腔炎性疾病后遗症是妇科常见疑难病种，严重影响女性的健康和生活质量。同时，盆腔炎性疾病后遗症是中医药治疗的优势病种，归属为癥瘕、妇人腹痛、不孕等病证范畴。认为血瘀是SPID的基本病理改变，以此提出“化瘀通络法”有利于改善SPID盆腔血瘀微环境。炎性因子IL-17A/IL-17F与多种炎症疾病相关，是启动炎症反应的必要因子之，但在妇科领域的探索仍未空白，从而成为目前研究热点。因此，“IL-17A/IL-17F-MAPK途径-MCP-1/MIP-2”细胞通讯轴成为研究化瘀通络法改善SPID盆腔血瘀微环境的有力切入点。建立小鼠SPID模型，运用超声影像系统、免疫组化、Western blot法检测治疗前后血管重建相关因子的表达；培养小鼠胚胎成纤维细胞(NIH 3T3)，采用ELISA、BD CBA、siRNA技术探讨“IL-17A/IL-17F-MAPK途径-MCP-1/MIP-2”细胞通讯轴分子作用机制及化瘀通络法的干预效果。体外建立子宫内膜三维立体培养系统，运用Milliplex多功能液相芯片技术检测血管生成相关因子及探讨中药的作用靶点。实验结果发现：（1）SPID 小鼠上生殖道组织 VEGF、Ang-2、OPN 呈高表达，提示病变局部血管新生水平较高；化瘀通络法可降低SPID 小鼠上生殖道血管新生水平，有利于组织修复，避免组织进一步破坏。（2）SPID小鼠血清IL-17A、IL-17F、MCP-1及MIP-2均高于对照组，提示SPID可导致IL-17A、IL-17F、MCP-1及MIP-2等炎性因子升高，而化瘀通络法可降低SPID小鼠IL-17A、IL-17F、MCP-1、MIP-2炎性因子水平达到治疗效果。（3）NIH-3T3为载体细胞，IL-17A/IL-17F刺激因子干预，模拟SPID细胞离体模型，证实前期假设IL-17A/IL-17F --MAPK --MCP-1 /MIP-2信号转导通路，通过BD CBA或Western blot发现JNK、ERK、P38通道开启特点，再次证实化瘀通络法对其抑制作用，最后通过siRNA干扰技术，进行了反向验证。阐明了化瘀通络法改善盆腔炎性疾病后遗症的作用机制。（4）本研究通过对增生期子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞的体外培养建立了盆腔炎行疾病后遗症血瘀微环境子宫内膜细胞的三维立体模型，发现了化瘀通络中药在改善盆腔炎性疾病后遗症